癌相關(guān)成纖維細(xì)胞促進(jìn)唾液腺腺樣囊性癌侵襲及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:唾液腺腺樣囊性癌(Salivary gland adenoid cystic carcinoma，ACC)侵襲性強(qiáng)，易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究的目的為探究體外條件下ACC來(lái)源的癌相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancer associated fibroblasts，CAF）的生物學(xué)特性，及其對(duì)ACC細(xì)胞侵襲的影響。
　　方法:本研究通過(guò)HE染色方法，對(duì)兩例ACC組織進(jìn)行病理診斷;免疫組織化學(xué)染色的方法檢測(cè)ACC組織間質(zhì)中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(

2、α-Smooth muscle actin，α-SMA)的表達(dá)情況。對(duì)這兩個(gè)新鮮ACC組織中提取的原代細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和純化，并通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色的方法檢測(cè)原代細(xì)胞中廣譜細(xì)胞角蛋白(pan-cytokeratin，CK)、波形蛋白(vimentin，VIM)、α-SMA、成纖維細(xì)胞活化蛋白(fibroblast activatedprotein，F(xiàn)AP)、成纖維特異性蛋白1（fibroblast specific protein1，F(xiàn)SP

3、-1）的表達(dá)情況。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)考察CAF細(xì)胞的遷移能力。Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃臀⒘骺匦酒Ｐ涂疾霤AF的侵襲能力。收集CAF的條件培養(yǎng)液(conditionalmedium，CM)，通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)考察CAF對(duì)ACC細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。通過(guò)微流控芯片模型，研究ACC細(xì)胞與CAF侵襲時(shí)的相互作用關(guān)系。通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶和干擾CXCL12/CXC R4信號(hào)通路來(lái)考查CAF對(duì)AC

4、C侵襲的抑制作用。
　　結(jié)果:觀察HE染色切片，兩例病例組織均為ACC，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明α-SMA在ACC組織的間質(zhì)中表達(dá)陽(yáng)性。細(xì)胞免疫熒光染色方法鑒定從ACC組織中提取的原代CAF，結(jié)果顯示這些細(xì)胞CK表達(dá)陰性，VIM表達(dá)陽(yáng)性，幾乎所有的細(xì)胞都表達(dá)FAP和FSP-1，大部分細(xì)胞表達(dá)α-SMA，提示我們提取這些原代細(xì)胞表達(dá)典型的CAF生物學(xué)標(biāo)記物。傳統(tǒng)的細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)以及Transwell

5、小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)均顯示CAF與正常牙齦成纖維細(xì)胞相比，其遷移能力和在垂直方向上的侵襲能力更強(qiáng);微流控芯片的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明CAF在水平方向上也具有較強(qiáng)的侵襲能力。并且，與空白對(duì)照組相比較，CAF可以促進(jìn)ACC細(xì)胞系SACC-LM和SACC-83細(xì)胞的遷移、侵襲。將SACC-LM和SACC-83細(xì)胞與CAF在微流控芯片平臺(tái)上共培養(yǎng)，我們發(fā)現(xiàn)CAF總是位于侵襲通道的前沿，SACC-LM和SACC-83細(xì)胞沿著CAF在基質(zhì)膠中建立的侵襲通道向前移

6、動(dòng)。而SACC-LM和SACC-83細(xì)胞與正常牙齦成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，SACC-LM和SACC-83細(xì)胞位于侵襲的前沿。經(jīng)過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，SACC-LM和SACC-83細(xì)胞與CAF共培養(yǎng)時(shí)，ACC細(xì)胞侵襲到基質(zhì)膠中的面積更大，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。CAF促進(jìn)ACC侵襲的抑制實(shí)驗(yàn)顯示，GM6001完全抑制ACC和CAF細(xì)胞侵襲入基質(zhì)膠內(nèi);AMD3100可以抑制SACC-LM和SACC-83細(xì)胞的侵襲，特別是SACC-LM和SACC-83沒(méi)