熏蒸劑對(duì)姜根際細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響及姜內(nèi)生理細(xì)菌的多樣性分析.pdf

1、本文在山東泰安邱家店布置試驗(yàn)，分別在生姜種植期、苗期、旺盛生長(zhǎng)期前期、后期和根莖膨大期前期、后期采集無(wú)熏蒸劑處理、溴甲烷熏蒸、氯化苦熏蒸的生姜根際土壤樣品。采用T-RFLP和構(gòu)建16S rDNA文庫(kù)的方法，并且結(jié)合RDA，CCA等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法探討了使用熏蒸劑對(duì)生姜根際細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的影響，并且篩選生姜內(nèi)生有益細(xì)菌研究其遺傳多樣性。
　　 T-RFLP分析表明，使用熏蒸劑處理后的土壤中，在生姜的種植期和苗期，細(xì)菌的多樣性要明顯低于沒(méi)有

2、使用熏蒸劑處理的樣品;而當(dāng)進(jìn)入旺盛生長(zhǎng)期之后，熏蒸劑效果逐漸減弱，根際土壤中的細(xì)菌種類(lèi)和數(shù)量又開(kāi)始逐漸增加，當(dāng)進(jìn)入根莖膨大期后期之后，使用熏蒸劑處理過(guò)的生姜根際土壤細(xì)菌的多樣性仍然要比無(wú)處理的樣品要低。
　　 16S rDNA克隆文庫(kù)的結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)氯化苦處理的土壤樣品中，在生姜的種植期，占優(yōu)勢(shì)的菌群為厚壁菌門(mén)(21.1％)和γ-變形桿菌門(mén)(36.8％)，而無(wú)處理的土壤樣品中這兩種菌并不占優(yōu)勢(shì)，無(wú)處理的土壤樣品中占優(yōu)勢(shì)的菌群為放

3、線(xiàn)菌門(mén)(25.9％)和擬桿菌門(mén)(37％)。而且，在種植期時(shí)與無(wú)處理的土壤樣品相比，氯化苦處理過(guò)的土壤樣品中少了放線(xiàn)菌門(mén)和芽單胞菌門(mén);在苗期時(shí)，缺少了芽單胞菌門(mén)、疣微菌門(mén)、浮霉菌門(mén)和硝化螺菌門(mén)，說(shuō)明熏蒸劑的使用嚴(yán)重影響了生姜根際土壤中的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)。
　　 通過(guò)對(duì)土壤樣品理化性質(zhì)的測(cè)定，我們發(fā)現(xiàn)，在生姜的種植期以及苗期，使用熏蒸劑熏蒸后的土壤中，有機(jī)質(zhì)的分解速率和腐殖質(zhì)的降解速率都要比無(wú)處理的低很多，而且對(duì)速效磷、速效鉀以及鐵錳銅

4、鋅等微量元素的積累速率和積累量都產(chǎn)生了嚴(yán)重的影響，雖然后期隨著微生物種類(lèi)的逐漸恢復(fù)，這一影響有所減弱，但是，使用熏蒸劑嚴(yán)重影響了土壤中的各礦物元素的互相轉(zhuǎn)化，不僅影響了生姜的正常生長(zhǎng)，而且容易使土壤板結(jié)。
　　 采用R2A培養(yǎng)基分離生姜內(nèi)生細(xì)菌，結(jié)果顯示，生姜內(nèi)生細(xì)菌的數(shù)量在10.4×104cfu/gFW到20.2×104 cfu/g FW之間，內(nèi)生細(xì)菌的最大數(shù)量出現(xiàn)在生姜的苗期。結(jié)合菌落和細(xì)菌形態(tài)觀察，我們共分離得到了248株

5、內(nèi)生細(xì)菌，其中90株具有產(chǎn)吲哚乙酸(IAA)的能力，而17株具有拮抗能力。根據(jù)ARDRA和16S rDNA分析，這107株內(nèi)生細(xì)菌共分為16個(gè)屬。其中芽孢桿菌（Bacillus）、假單胞菌（Pseudomonas）以及腸桿菌屬（Enterobacter）是優(yōu)勢(shì)菌群，而且內(nèi)生細(xì)菌多樣性最高的時(shí)期是苗期，這與菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果是一致的。17株具有拮抗效果的內(nèi)生細(xì)菌中，16株對(duì)生姜莖腐病具有拮抗效果，6株對(duì)生姜半點(diǎn)病有拮抗效果，其中芽孢桿菌是拮抗

6、菌的優(yōu)勢(shì)菌種。在產(chǎn)LAA的內(nèi)生細(xì)菌中，熒光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)、巨大芽孢桿菌（B.megaterium）以及Enterobacter ludwigii具有最高的產(chǎn)吲哚乙酸的能力。使用濾紙片法檢測(cè)具有生防功能的內(nèi)生細(xì)菌是否能夠被鮮姜汁的抑制的實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，只有少數(shù)幾株能夠被抑制，而且大部分是在苗期分離到的，包括:Roseateles depolymerans，Chryseobacterium taiwan