5個(gè)現(xiàn)代月季品種愈傷組織再生體系的建立與體細(xì)胞培養(yǎng)的研究.pdf

1、現(xiàn)代月季是世界上最重要的觀(guān)賞植物之一,其四季常開(kāi)、香味濃郁、花色豐富,一直為眾人所青睞,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值,是現(xiàn)代城市綠化中不可替代的材料。我國(guó)北方由于氣候原因,缺乏可以廣泛栽培并能露地越冬的現(xiàn)代月季品種。
　　 當(dāng)前在月季育種中存在的突出問(wèn)題是現(xiàn)代月季遺傳背景狹窄,傳統(tǒng)育種方法周期過(guò)長(zhǎng),而且染色體數(shù)目及倍性差異造成遠(yuǎn)緣雜交不親和與雜種的高度不育。生物工程則為生物品種的改造開(kāi)辟了新途徑。愈傷組織和體細(xì)胞是無(wú)性系變異和遺傳轉(zhuǎn)化的良

2、好的受體材料,通過(guò)愈傷組織再生和體細(xì)胞培養(yǎng)可以獲得無(wú)性系變異植株,而且體細(xì)胞融合為解決遠(yuǎn)緣雜交不育提供了一個(gè)很有潛力的新途徑。但是現(xiàn)代月季再生途徑的建立還存在很大的困難,而且體細(xì)胞培養(yǎng)難度很大,體細(xì)胞培養(yǎng)獲得再生植株的報(bào)道還很有限,因此本研究對(duì)促進(jìn)月季的抗寒育種及其他性狀的改良都具有重要的意義。
　　 本研究通過(guò)探究影響現(xiàn)代月季快速繁殖和愈傷組織誘導(dǎo)再生的因素,并利用獲得的愈傷組織建立細(xì)胞懸浮系,探討了影響現(xiàn)代月季體細(xì)胞培養(yǎng)的各

3、種因子,旨在建立起現(xiàn)代月季高效的快速繁殖體系、愈傷組織再生和體細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)體系,為以后導(dǎo)入抗寒等目的基因、體細(xì)胞無(wú)性系變異的篩選及原生質(zhì)體培養(yǎng)和融合等遺傳操作打下良好的基礎(chǔ)。本研究的主要結(jié)果如下:
　　 1.建立了5個(gè)現(xiàn)代月季品種快速繁殖體系:1號(hào)月季品種不定芽萌發(fā)和增殖的最佳培養(yǎng)基為:MS+6-BA2.5mg·L-1+NAA0.05mg·L-1,增殖率能達(dá)到4.2;2號(hào)、6號(hào)和8號(hào)月季品種最佳培養(yǎng)基為:MS+6-BA2.0mg

4、·L-1+NAA0.05mg·L-1,增殖率分別能達(dá)到3.68、4.07和4.2;9號(hào)月季品種最佳培養(yǎng)基為:MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1,增殖率可達(dá)到3.99;5個(gè)月季品種無(wú)菌苗的最適生根培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA0.05mg·L-1和1/2MS+NAA0.1mg·L-1,生根率都可達(dá)80％以上:各品種無(wú)菌苗通過(guò)馴化煉苗,露地栽植成活率都可達(dá)88％以上。
　　 2.篩選出5個(gè)現(xiàn)代月季品種愈傷組織誘

5、導(dǎo)最佳培養(yǎng)基。1號(hào)、8號(hào)月季品種葉片誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D3.0mg·L-1,誘導(dǎo)率均可達(dá)到100.00％:2號(hào)、6號(hào)、9號(hào)月季品種葉片誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D2.0mg·L-1+6.BA0.5mg·L-1,誘導(dǎo)率分別可達(dá)到97.67％、98.67％、100.00％。1號(hào)、6號(hào)月季品種幼莖誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D3.0mg·L-1,誘導(dǎo)率分別可達(dá)到78.67％,84.33％;2號(hào)月

6、季品種幼莖誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D2.0mg·L-1,誘導(dǎo)率可達(dá)到73.67％:8號(hào)、9號(hào)月季品種幼莖誘導(dǎo)愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D2.0mg·L-1+6.BA0.5mg·L-1,誘導(dǎo)率分別為82.33％、80.33％。
　　 3.篩選出4個(gè)現(xiàn)代月季品種愈傷組織分化最佳培養(yǎng)基。1號(hào)品種葉片愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基為MS+2,4-D0.2mg·L-1+TDZ9.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1

7、,分化途徑為不定芽發(fā)生途徑,分化率可達(dá)18.00％;6號(hào)品種葉片愈傷組織分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg·L-1+2,4-D1.0mg·L-1+TDZ8.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1,分化途徑為不定芽發(fā)生途徑,分化率可達(dá)22.00％;適合8號(hào)品種葉片愈傷組織分化的培養(yǎng)基為1/2MS+6-BA0.5mg·L-1+TDZ10.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1、MS+2,4-D0.2mg·L-1+TDZ9.0mg·L

8、-1+GA30.1mg·L-1,前者愈傷組織分化途徑為胚狀體途徑,胚狀體通過(guò)繼代培養(yǎng)可形成再生植株,后者分化途徑為不定芽途徑,分化率分別為18.67％、21.33％,幼莖愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基為MS+TDZ8.0mg·L-1,分化途徑為不定芽發(fā)生途徑,分化率可達(dá)46.67％:9號(hào)品種葉片愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1mg·L-1+TDZ9.0mg·L-1+GA30.5mg·L1-,分化途徑為不定芽途徑,分化率達(dá)到16.

9、67％,幼莖愈傷組織分化的培養(yǎng)基為MS+2,4-D0.2mg·L-1+TDZ9.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1,分化途徑為胚狀體途徑,分化率可達(dá)35.33％。
　　 4.以5個(gè)月季品種的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分相同的液體培養(yǎng)基可建立起穩(wěn)定的懸浮細(xì)胞系,懸浮系最佳的繼代時(shí)間間隔為8-10d,懸浮系培養(yǎng)后4-8天內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,活性強(qiáng),適宜用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞系的再生培養(yǎng);不同基因型間月季懸浮系生長(zhǎng)特性差異不顯著。
　　

10、5.以1號(hào)、8號(hào)和9號(hào)三個(gè)品種的懸浮細(xì)胞可誘導(dǎo)出愈傷組織。1號(hào)品種懸浮細(xì)胞在固體培養(yǎng)基MS+6-BA0.1mg·L-1+2,4.D1.0mg·L-1+KT0.1mg·L-1,愈傷組織誘導(dǎo)率為22.00％;8號(hào)品種懸浮細(xì)胞在同體培養(yǎng)基MS+2,4-D1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+KT0.5mg·L-1愈傷組織誘導(dǎo)率為27.33％;9號(hào)品種懸浮細(xì)胞在固體培養(yǎng)基MS+2,4-D1.0mg·L-1+NAA1.0mg·L-1+KT

11、0.5mg·L-1愈傷組織誘導(dǎo)率為26.67％,懸浮細(xì)胞在液體培養(yǎng)基MS+6.BA0.5mg·L-1+2,4-D1.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1愈傷組織誘導(dǎo)率僅為2.67％。
　　 6.1號(hào)品種懸浮細(xì)胞愈傷組織在培養(yǎng)基MS+2,4-D0.2mg·L-1+TDZ9.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1上可直接分化出不定芽,分化率可達(dá)32.33％;8號(hào)品種懸浮細(xì)胞愈傷組織在培養(yǎng)基MS+2,4-DO.2mg·L-1+T