水稻株型相關(guān)基因的定位及LAX互作蛋白的篩選.pdf

1、水稻的株型，是影響產(chǎn)量的關(guān)鍵因素之一，包括株高、分蘗數(shù)、分蘗角度以及穗形態(tài)。而穗的大小、枝梗數(shù)以及小穗的數(shù)量與水稻產(chǎn)量直接相關(guān)，因此本研究構(gòu)建了粳稻品種ZH11(Zhonghua11)幼穗的cDNA文庫(kù)，可用于穗發(fā)育相關(guān)基因的互作蛋白的篩選，包括稀穗基因LAX1、LAX2。另外，從水稻T-DNA插入突變體庫(kù)RMD篩選了一些株型突變體進(jìn)行表型分析，并使用這些株型突變體與秈稻品種ZS97(Zhenshan97)雜交構(gòu)建遺傳定位群體，通過(guò)圖位

2、克隆的方法來(lái)定位基因。本研究期望找到LAX1、LAX2的候選互作蛋白，及新的株型基因，為解析水稻株形態(tài)建成的機(jī)制提供理論基礎(chǔ)和材料資源。本研究的主要結(jié)果如下:
　　1.從粳稻ZH11的幼穗組織(＜4.0mm)中獲得總RNA，通過(guò)SMART同源重組交換技術(shù)在酵母菌株Y187中成功構(gòu)建了幼穗的cDNA文庫(kù)。然后分別構(gòu)建用于篩選LAX1、LAX2互作蛋白的bait載體，對(duì)幼穗cDNA文庫(kù)進(jìn)行篩選。篩選到6個(gè)LAX2的候選互作蛋白，其中包

3、括泛素激活酶、核苷二磷酸激酶和F-box蛋白;篩選到12個(gè)LAX1的候選互作蛋白，包括2個(gè)F-box家族的蛋白，且其中1個(gè)F-box蛋白同時(shí)也是LAX2的候選互作蛋白。它們之間的互作關(guān)系需要其他的體內(nèi)或體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)行證明。
　　2.將PS4定位在4號(hào)染色體，發(fā)現(xiàn)ps4突變體中HTD1基因的第一個(gè)外顯子中有41bp的缺失，同時(shí)對(duì)PS4雜合植株的后代進(jìn)行基因型檢測(cè)，表型和基因型是共分離的，即PS4是HTD1的一個(gè)新的等位基因。
　

4、　3.ps30是一個(gè)稀穗突變體，將其定位在6號(hào)染色體上的標(biāo)記RM3827和RM5957的2.2Mb之間，且MOC1基因也位于該區(qū)間。在突變體和野生型中對(duì)MOC1的啟動(dòng)子、編碼區(qū)進(jìn)行比較擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)在啟動(dòng)子區(qū)有大片段的插入，利用TAIL-PCR分離插入序列，比對(duì)發(fā)現(xiàn)該序列插入在啟動(dòng)子區(qū)-1091處。同時(shí)進(jìn)行基因型檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)表型和基因型是共分離的。
　　4.ps12是一個(gè)株型突變體，將其定位在3號(hào)染色體上的03Indel-3和RM148