一種新phyA基因的克隆、表達(dá)及其生物活性測(cè)定.pdf

1、重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文一種新phyA基因的克隆、表達(dá)及其生物活性測(cè)定姓名：范守城申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物醫(yī)學(xué)工程指導(dǎo)教師：霍丹群20040501重慶大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要表達(dá)主要形式為胞內(nèi)表達(dá)、最佳誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間為3h、IPTG誘導(dǎo)濃度O309／L、最適表達(dá)溫度為30℃。5、采用NiNTA親和層析進(jìn)行表達(dá)產(chǎn)物的分離純化，SDSPAGE和Westernbloting驗(yàn)證純化的目標(biāo)蛋白。得到電泳純的重組植酸酶，其分子量約為50kDa，表達(dá)

2、蛋白占大腸桿菌總蛋白的3662％；免疫學(xué)檢測(cè)這一特異蛋白帶即是帶有6個(gè)組氨酸的phyA蛋白。6、進(jìn)行重組植酸酶部分酶學(xué)特性研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：檀酸酶的最適溫度溫度為65“C、最適pH為45，金屬離子對(duì)植酸酶活性存在不同程度的影響；重組植酸酶酶活較天然植酸酶活性提高了169倍。本研究中，BL21pET30a十_p盤(pán)州和MGl363一pMG36ephyA基因工程菌的構(gòu)建，為實(shí)現(xiàn)生物反應(yīng)器大量、高效生產(chǎn)耐溫性好的植酸酶提供了優(yōu)良的菌種。同時(shí)開(kāi)