一種從藥用植物中快速篩選RXRα配體化合物的模型研究.pdf

1、維甲酸X受體α(RXRα)是研究抗癌藥物的重要靶點(diǎn)之一，其配體Targretin已由FDA批準(zhǔn)用于治療皮膚癌，目前已知的天然RXRα小分子配體非常有限，因此建立一種新的活性篩選模型從中藥及天然產(chǎn)物中快速發(fā)現(xiàn)以RXRα為活性靶點(diǎn)的新型小分子配體具有重要意義。
　　前期研究發(fā)現(xiàn)黃牛木屬植物中的氧雜蒽酮類化合物能夠抑制RXRα的轉(zhuǎn)錄活化功能，其中，CF-31能夠直接與RXRα通過(guò)疏水性相互作用的方式結(jié)合，因此，本研究以黃牛木屬植物黃牛木

2、和紅芽木為擬建立活性篩選體系的候選藥材，對(duì)其60％乙醇水提取物經(jīng)大孔樹脂90％乙醇洗脫餾分（CCC和CFC）進(jìn)行液質(zhì)分析，以CF31含量為指標(biāo)，最終選擇黃牛木作為模型藥材，對(duì)CCC餾分中的氧雜蒽酮類化合物進(jìn)一步富集得到粗餾分CCC2，用于后續(xù)活性篩選，此外，對(duì)靶蛋白R(shí)XRα-LBD的誘導(dǎo)條件進(jìn)行了優(yōu)化，利用優(yōu)化條件制備了RXRα-LBD蛋白樣品，并綜合運(yùn)用BCA蛋白濃度測(cè)定法、考馬斯亮藍(lán)染色法、免疫印跡法、示差掃描量熱法、等溫滴定量熱檢

3、測(cè)法對(duì)提取的蛋白進(jìn)行檢測(cè)和分析。
　　利用SPR技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)CCC2與RXRα-LBD的結(jié)合解離模式是一種慢結(jié)合慢解離的模式，提示CCC2可應(yīng)用于靶向親和篩選體系，進(jìn)而，利用靶向親和-液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，基于配體化合物與靶受體特異性結(jié)合的原理，采用親和超濾結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用的方法篩選黃牛木粗餾分CCC2中可能與RXRα特異結(jié)合的活性成分，通過(guò)對(duì)比分析蛋白組及失活蛋白組的差異，初步篩選出5個(gè)可能與RXRα特異結(jié)合的活性成分，結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)，初步鑒