鐵皮石斛工廠化育苗技術(shù)研究及遺傳穩(wěn)定性分析.pdf

1、鐵皮石斛是蘭科多年生草本植物，為著名的藥用花卉。本研究以鐵皮石斛原球莖為材料，進行鐵皮石斛工廠化育苗生產(chǎn)技術(shù)研究，并進行移栽后管理，同時利用ISSR技術(shù)對不同代數(shù)的鐵皮石斛試管苗進行遺傳穩(wěn)定性鑒定，最后對鐵皮石斛工廠化育苗技術(shù)開展探討及效益評價分析。主要結(jié)果如下：
　　1.鐵皮石斛工廠化育苗生產(chǎn)技術(shù)研究
　　比較了不同植物生長調(diào)節(jié)劑和添加物濃度對鐵皮石斛原球莖增殖及原球莖再分化植株、小苗壯苗生根的影響，探討鐵皮石斛工廠化育苗

2、技術(shù)。研究以鐵皮石斛原球莖為材料，試驗采用正交設(shè)計L9(34)，比較不同的基本培養(yǎng)基、6-BA、NAA濃度對鐵皮石斛原球莖增殖的影響，以優(yōu)化鐵皮石斛原球莖增殖培養(yǎng)基。試驗結(jié)果表明：鐵皮石斛原球莖增殖在1/2 MS+6-BA0.5+NAA0.1培養(yǎng)基中最好；利用綜合評價得分加權(quán)法，算出其最高得分為5.365，其中6-BA濃度對其影響最大，最適濃度為0.5 mg/L。以鐵皮石斛株高0.8 cm小苗為材料，優(yōu)化鐵皮石斛小苗壯苗生根培養(yǎng)基。試驗

3、采用正交設(shè)計L9(34)，比較不同的6-BA、NAA、蛋白胨、香蕉泥濃度對鐵皮石斛小苗壯苗生根的影響，試驗結(jié)果表明：在MS+6-BA0.5+NAA0.1+蛋白胨2 g/L+香蕉泥80 g/L培養(yǎng)基上，鐵皮石斛小苗壯苗生根效果最好；利用綜合評價得分加權(quán)法，算出其最高得分為7.350，其中蛋白胨濃度對其影響最大，最適濃度為2g/L。
　　2.鐵皮石斛試管苗移栽管理
　　通過比較試驗發(fā)現(xiàn)，當鐵皮石斛生根壯苗生長到4~5 cm，選取

4、4~6節(jié)，4片葉片以上，3條以上的不定根的瓶苗馴化進行移栽，軟化并洗凈試管苗。鐵皮石斛幼苗期管理，保持溫室大棚內(nèi)溫度在20~30℃、空氣相對濕度90％左右，并注意大棚的遮光，每半個月噴施一次低濃度的鉀肥。成苗管理，要根據(jù)季節(jié)變化，及時開啟或關(guān)閉遮陽網(wǎng)及風機等設(shè)備，使大棚內(nèi)溫度維持在20~30℃，空氣相對濕度在60%~70%，光照強度10000 lx左右。鐵皮石斛移栽后的栽培管理，需要注意防止病蟲害發(fā)生。
　　3.應(yīng)用ISSR技術(shù)對

5、鐵皮石斛試管苗進行遺傳穩(wěn)定性分析
　　以鐵皮石斛第1代到第9代間的各代試管苗的DNA為模板，以40對UBC引物，篩選出擴增條帶清晰、多態(tài)性好的12對引物，對鐵皮石斛試管苗進行遺傳穩(wěn)定性分析。篩選出的12對引物一共擴增了80個條帶，多態(tài)性條帶有29條，引物UBC845擴增條帶數(shù)最多為11條，引物UBC811擴增條帶數(shù)最少為3條。用遺傳距離軟件NTSYS對遺傳相似系數(shù)進行計算，結(jié)果表明：鐵皮石斛試管苗的平均遺傳相似系數(shù)為0.85372

6、7，最大的為0.924051，最小的為0.772152。鐵皮石斛試管苗間的遺傳相似系數(shù)比較接近，這說明它們之間遺傳性狀比較穩(wěn)定。用模型軟件STRUCTURE進行聚類分析，設(shè)置K值為2~5，8次重復(fù)運行計算，其結(jié)果表明：在K=3時出現(xiàn)拐點，由此可將9個不同代數(shù)的鐵皮石斛類原球莖試管苗分為3個類群。論文試驗研究將距離聚類和模型聚類二者相結(jié)合分析，這樣可以更加清楚的了解不同樣本間的遺傳關(guān)系。
　　4.鐵皮石斛工廠化育苗生產(chǎn)模式建立及效益