hELP3與hELP4、yELP4及CTK1之間相互作用的研究.pdf

1、組蛋白甲基化、乙酰化等表觀遺傳修飾對基因表達有重要影響。已有的研究結(jié)果表明,酵母Elongator復(fù)合物作為一個具有組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶活性的復(fù)合體,協(xié)助RNA聚合酶Ⅱ參與GAL1,SSA3等基因的轉(zhuǎn)錄延伸過程。
　　 人Elongator復(fù)合物已從HeLa細胞中被分離出來,并有研究表明它與酵母Elongator復(fù)合物的組成高度保守,功能極為相似。Elongator復(fù)合物中最引人矚目的是它的ELP3亞基,它有組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶活性,

2、從屬于GNAT家族。缺失ELP3亞基可導(dǎo)致多種生長缺陷,其中有些與轉(zhuǎn)錄延伸缺陷相關(guān)。有報道稱ELP3蛋白在神經(jīng)生物學(xué)中也發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。Elongator復(fù)合物可對組蛋白H3的第14位賴氨酸和組蛋白H4的第8位賴氨酸進行乙酰化修飾,且ELP3亞基C末端的保守的HAT活性中心為Elongator行使功能所必需。生物信息學(xué)分析研究表明,ELP3的N末端有一個類似于S-腺苷甲硫氨酸激酶的結(jié)構(gòu)域,這個結(jié)構(gòu)域包含F(xiàn)e4S4簇,可結(jié)合S-腺苷

3、甲硫氨酸。
　　 ELP4也是Elongator復(fù)合物的組成成分之一,Elongator復(fù)合物參與轉(zhuǎn)錄和RNA的修飾過程。Elongator復(fù)合物的消耗將導(dǎo)致與細胞能動性和細胞位移有關(guān)的基因的腦特異性下調(diào)表達。我們認為ELP4基因中非編碼序列的突變將阻礙Elongator介導(dǎo)的腦特異性的基因間的相互作用,從而影響腦部發(fā)育,導(dǎo)致癲癇發(fā)作和神經(jīng)發(fā)育紊亂。
　　 基于以上研究成果,本論文構(gòu)建了”誘餌”融合質(zhì)粒pGBKT7-hE

4、LP3和“獵物”融合質(zhì)粒pGADT7-Rect-yELP4,pGADT7.Rect-hELP4,pGADT7-Rect-CTK1,分三組共轉(zhuǎn)化入AH109酵母菌菌株中,通過酵母雙雜交實驗初步檢測ELP3與其他三種蛋白在生理狀態(tài)下有無相互作用,并通過GST pull-down實驗在體外對酵母雙雜交實驗獲得的結(jié)果進一步驗證。
　　 實驗結(jié)果表明,hELP3亞基與hELP4之間存在相互作用,而hELP3亞基與yELP4和CTK1之間沒