一種新型HBsAg中高值定量試劑(CMIA法)的研制與臨床性能評價.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、背景:
  乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定量檢測在指導慢性乙型肝炎病人的臨床治療中具有重要的應用價值。目前由于臨床慢性乙肝病人標本HBsAg濃度較高,現(xiàn)有商品化試劑如羅氏、雅培等均需要稀釋才能檢測HBsAg定量水平,檢測效率較低。因此,本研究擬研制一種無需稀釋便可以檢測出大部分臨床標本的HBsAg中高值定量試劑盒(化學發(fā)光微粒子免疫檢測法),提高臨床實驗室對 HBsAg定量的檢測效率。
  方法:
  通過抗體間

2、兩兩交叉配對的方式,篩選出合適的HBsAg抗體包被磁微粒作為磁微粒試劑(M),標記吖啶酯作為吖啶酯試劑(R2),與反應稀釋液(R1)共同組成化學發(fā)光微粒子免疫分析法HBsAg中高值定量試劑盒。用所研制的試劑檢測一系列陰性和陽性樣本,并以陽性樣本和陰性樣本檢測信號的比值(P/N)、試劑檢測范圍、標準曲線線性擬合相關系數(shù)r值等作為反應活性的判斷依據(jù),選擇最佳的試劑制備工藝和反應體系,并對試劑的線性范圍、檢測限、精密度、交叉反應等性能做評價。

3、通過進一步檢測具有羅氏背景的臨床樣本,研究該試劑的臨床性能,評估該試劑對不同感染階段和不同基因型樣本的檢測結果與羅氏檢測結果的相關性、一致性等。
  結果:
  通過篩選最終選用Ab-3、Ab-4、Ab-6和Ab-8包被磁微粒,最佳包被工藝為:每mg磁微粒包被40ug抗體,包被緩沖液為0.02mol/L pH6.5 PBS,包被溫度為25℃,包被時間3h,終止時間3h;通過篩選最終選用Ab-1標記吖啶酯,最佳標記工藝為:每1

4、00ug原料標記12ul的0.005 mol/L吖啶酯母液,標記緩沖液為0.02mol/L pH8.0PBS,標記溫度為25℃,標記時間30min,終止時間30min;最佳反應體系為:反應稀釋液用量100ul,樣本加樣量20ul,磁微粒試劑和吖啶酯試劑用量均為50ul,磁微粒的使用濃度分別為0.4mg/ml,吖啶酯稀釋比例為1/200;試劑性能評估結果顯示,優(yōu)化后試劑檢測范圍為20IU/ml~100000IU/ml,最低檢測限不高于20

5、IU/ml,試劑檢測精密度小于10.0%,試劑檢測不受常規(guī)濃度的膽紅素、血脂,溶血、RF及抗凝劑的影響,且與其他病毒陽性樣本無交叉反應;臨床試驗結果表明,該試劑與羅氏試劑檢測結果相關性好r=0.978,回歸方程為y=1.001x-0.018(y為考核試劑,x為對比試劑),對不同感染階段、不同基因型及不同濃度水平的HBsAg陽性樣本相關性一致性均好,兩試劑檢測結果的符合率為100%,Kappa值為1。
  討論:
  新型乙肝

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