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文檔簡介
1、目的:前期通過對我國優(yōu)秀長跑運(yùn)動(dòng)員mtDNA全基因組掃描,課題組發(fā)現(xiàn)7個(gè)多態(tài)位點(diǎn)可以作為長跑運(yùn)動(dòng)員選材的分子標(biāo)記。本研究通過與有氧運(yùn)動(dòng)能力相關(guān)指標(biāo)的關(guān)聯(lián)性分析,以及質(zhì)粒構(gòu)建、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、基因表達(dá)等方法探討上述mtDNA分子標(biāo)記的調(diào)控機(jī)理。
方法:(1)用遞增負(fù)荷跑臺測試79名優(yōu)秀長跑女運(yùn)動(dòng)員的最大攝氧量、無氧閾等指標(biāo),用微測序反應(yīng)對受試者7個(gè)mtDNA多態(tài)位點(diǎn)進(jìn)行分型,并與有氧運(yùn)動(dòng)能力進(jìn)行關(guān)聯(lián)性分析;(2)全基因合成mtDNA非
2、編碼區(qū)mt235、mt514-515、mt16183、mt16290和mt16319位點(diǎn)片段,連接載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒,檢測轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒24h后細(xì)胞內(nèi)報(bào)告基因的表達(dá);(3)PCR擴(kuò)增和定點(diǎn)突變mtDNA編碼區(qū)mt8794和mt12338位點(diǎn)片段,連接到真核表達(dá)載體,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,檢測重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h的蛋白表達(dá),同時(shí)檢測血液白細(xì)胞ATP6和ND5的基因表達(dá)水平。
結(jié)果:(1)mtDNA7個(gè)多態(tài)位點(diǎn)不同基因型的有氧運(yùn)動(dòng)能力
3、表型之間無顯著性差異;(2)除mt16290外,mtDNA非編碼區(qū)多態(tài)位點(diǎn)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞報(bào)告基因的表達(dá)量在不同基因型之間有顯著差異;與空載體相比,攜帶mt16319A的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞熒光素酶mRNA的表達(dá)顯著下降,而mt16290的兩種質(zhì)粒對報(bào)告基因的表達(dá)無顯著性影響;(3)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒293T細(xì)胞48h后ND5 mRNA及蛋白表達(dá)量無顯著性差異;mt8794和mt12338對應(yīng)的血液白細(xì)胞ATP6和ND5的蛋白含量無顯著性差異,但ATP6
4、 mRNA表達(dá)水平存在顯著差異。
結(jié)論:(1)mtDNA7個(gè)多態(tài)位點(diǎn)的不同基因型與優(yōu)秀女長跑運(yùn)動(dòng)員有氧運(yùn)動(dòng)能力表型之間無顯著關(guān)聯(lián)性,表明運(yùn)動(dòng)能力并非單個(gè)多態(tài)位點(diǎn)所能決定,是與其它因素共同作用的結(jié)果。(2)mt235、mt514-515、mt16183和mt16319多態(tài)位點(diǎn)影響下游基因的表達(dá)活性,可能是影響人有氧運(yùn)動(dòng)能力的重要調(diào)控因素。mt16290多態(tài)位點(diǎn)對下游基因轉(zhuǎn)錄和翻譯無顯著影響。(3)mt8794和mt12338多態(tài)
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