綠盲蝽抗呋蟲胺品系的汰選與其解毒酶的研究.pdf

1、綠盲蝽Apolygus lucorum Meyer-dür屬半翅目Hemiptera盲蝽科Miridae，是寄主廣泛的害蟲，分布范圍廣，在亞洲、歐洲、非洲、美洲都有發(fā)生，是中國近年來對(duì)棉花等重要經(jīng)濟(jì)作物危害嚴(yán)重的半翅目害蟲之一，具有發(fā)生世代長、世代重疊嚴(yán)重的特點(diǎn)。在防治過程中，由于其在田間活動(dòng)隱蔽、行動(dòng)能力強(qiáng)，加大了防治的困難。目前，化學(xué)防治仍是對(duì)綠盲蝽的防治中最為有效的手段，但在田間長期不合理使用殺蟲劑會(huì)導(dǎo)致綠盲蝽抗藥性的發(fā)生，從而加

2、大防治難度。
　　本研究選擇新鮮的四季豆飼養(yǎng)，在室內(nèi)完成對(duì)綠盲蝽的連續(xù)飼養(yǎng)。采取點(diǎn)滴法，對(duì)綠盲蝽進(jìn)行呋蟲胺毒力測(cè)定和抗性品系篩選。測(cè)定了綠盲蝽羧酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性，探索這兩種重要酶在綠盲蝽對(duì)呋蟲胺的抗性品系選育過程的作用，是否參與綠盲蝽對(duì)呋蟲胺抗性代謝。
　　經(jīng)過十二代的室內(nèi)篩選，綠盲蝽對(duì)呋蟲胺的抗性倍數(shù)僅達(dá)到近五倍，表現(xiàn)出低水平的抗性，推測(cè)產(chǎn)生高抗性的潛力較小。綠盲蝽對(duì)呋蟲胺的抗性雖然呈波浪式升高趨勢(shì)，但是抗性

3、增加幅度卻十分緩慢。在室內(nèi)篩選中，對(duì)綠盲蝽羧酸酯酶和谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶活性的測(cè)定，發(fā)現(xiàn)羧酸酯酶有顯著性的提升，而谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶無顯著的變化，認(rèn)為羧酸酯酶很可能參與了綠盲蝽對(duì)呋蟲胺抗性的代謝。
　　克隆得到兩條綠盲蝽成蟲細(xì)胞色素P450基因全長序列，分別為為CYP395G1和CYP4EY1。在對(duì)綠盲蝽CYP395G1和CYP4EY1與其他昆蟲P450序列比對(duì)中發(fā)現(xiàn)，綠盲蝽CYP395G1與其他昆蟲CYP家族序列一致性達(dá)30％,綠

4、盲蝽CYP4EY1與昆蟲其他CYP4家族序列一致性達(dá)60％。通過綠盲蝽CYP395G1和CYP4EY1兩個(gè)基因在不同發(fā)育階段表達(dá)分析，得出CYP395G1和CYP4EY1在綠盲蝽不同發(fā)育期均有表達(dá)。在呋蟲胺短期誘導(dǎo)后，成蟲體內(nèi)CYP395G1的表達(dá)量在6h，12h，24h，36h和48h時(shí)的表達(dá)量分別為對(duì)照的1.26，1.91，0.92，0.50和0.37倍。成蟲體內(nèi)CYP4EY1的表達(dá)量在6h，12h，24h，36h和48h時(shí)的表達(dá)量

5、分別為對(duì)照的1.02，0.64，0.53，0.40和0.36倍，經(jīng)12h短期誘導(dǎo)后CYP395G1表達(dá)量達(dá)到最大，而另一基因CYP4EY1表達(dá)量程下降趨勢(shì)。經(jīng)呋蟲胺長期篩選后，F(xiàn)12的CYP395G1基因表達(dá)量有顯著提升，CYP4EY1表達(dá)量仍然無顯著變化，推測(cè)CYP395G1基因可能參與了呋蟲胺的解毒過程。
　　本研究通過生物學(xué)測(cè)定、分子生物學(xué)及生物化學(xué)分析等方法對(duì)綠盲蝽進(jìn)行了研究，旨在為明確呋蟲胺的綠盲蝽抗藥性機(jī)制，為合理使用