大腸桿菌QseB-QseC信號(hào)途徑影響染色體復(fù)制起始和細(xì)胞運(yùn)動(dòng).pdf

1、大腸桿菌QseB/QseC二組分信號(hào)系統(tǒng)調(diào)控五十多種鞭毛和細(xì)胞毒性相關(guān)蛋白的表達(dá)。在本研究中，發(fā)現(xiàn)無論是在LB還是ABTGcasa培養(yǎng)基中，qseB基因缺失均會(huì)導(dǎo)致染色體復(fù)制起始提前;在突變體中轉(zhuǎn)入pqseB質(zhì)粒過表達(dá)QseB蛋白后，復(fù)制起始提前的現(xiàn)象均被恢復(fù)。qseB基因缺失會(huì)增加細(xì)胞中DnaA蛋白濃度;純化的QseB蛋白在體外不與oriC相互作用。在△qseC突變體細(xì)胞中也存在復(fù)制起始提前的現(xiàn)象。這些結(jié)果說明QseB/QseC信號(hào)途

2、徑的缺失會(huì)提高細(xì)胞中DnaA蛋白濃度，因此引起復(fù)制起始的提前。有趣的是，QseB蛋白靶基因fliM、fliQ、fliP或fliO的缺失引起復(fù)制起始延遲。還發(fā)現(xiàn)，QseB/QseC信號(hào)途徑的缺失不影響細(xì)胞大小，而鞭毛相關(guān)基因的缺失卻會(huì)影響細(xì)胞大小，說明細(xì)胞運(yùn)動(dòng)影響細(xì)胞分裂。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)QseC蛋白定位在細(xì)胞膜上，QseB蛋白定位在細(xì)胞質(zhì)中。
　　qseB基因的缺失會(huì)大大提高細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力，相反，突變體中過表達(dá)QseB蛋白使細(xì)胞

3、運(yùn)動(dòng)能力恢復(fù)至野生型。然而，在△qseC和△flhDC突變體細(xì)胞中，細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力明顯的減弱，說明QseC信號(hào)因子、FlhD和FlhC轉(zhuǎn)錄因子對(duì)于細(xì)胞正常的運(yùn)動(dòng)是必需的。正如所期待的，鞭毛基因的缺失會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的減弱。
　　GFP-QseB免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)表明，QseB在體外與伴侶蛋白DnaK和細(xì)胞分裂蛋白FtsZ有相互作用。通過細(xì)菌雙雜交實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了QseB在體內(nèi)確實(shí)與DnaK和FtsZ蛋白有相互作用。有趣的是，DnaK缺失或