玻璃體內注射用貝伐單抗PLGA緩釋微球的合成及鑒定研究.pdf

1、目的：Bevacizumab(貝伐單抗)（商品名Avastin，Genentech公司）是一種重組人VEGF單克隆全長抗體，分子量149kDa，可以同VEGF的所有異構體發(fā)生高親和力結合，間接阻斷VEGF和其受體的結合從而抑制新生血管的形成，從而抑制了新生血管的形成以及減少血管的通透性。但生物半衰期3-5天，目前臨床上需要每隔28天進行一次玻璃體腔注藥，極大增加了發(fā)生并發(fā)癥的概率。本實驗旨在研制玻璃體內注射用貝伐單抗聚乳酸-羥基乙酸共聚

2、物(PLGA)緩釋微球，并鑒定其相關性質。以期找到一種新的適用于玻璃體內注射的貝伐單抗緩釋劑型，延長藥物作用時間，增加眼內藥物濃度，減少重復注藥次數(shù)。
　　 方法：采用無水乳化法(S/O/hO)制備貝伐單抗-PLGA微球。然后稱取微球20mg，用1mL二氯甲烷渦旋振蕩5min溶解，離心棄去含聚合物的上清液溶液，重復五次后然后加10mlPBS充分溶解，得貝伐單抗樣品液，ELISA測定計算待測液中貝伐單抗的濃度，計算出微球中的貝伐單

3、抗含量，得微球的載藥量和包封率，掃描電鏡(SEM)觀測其形態(tài)及粒徑。稱取12.5mg的Bevacizumab-PLGA微球置于裝有2.5mLPBS緩沖溶液(PH=7.2)的離心管中，置于4℃冰箱中，分別在第1/2d、1d、3d、7d、14d、28d定時移去0.01mL緩釋液，并補充同樣體積的緩沖液，保存于離心管中并標號凍存于-80℃冰箱待測．ELISA法測定貝伐單抗?jié)舛?，從而計算出貝伐單抗微球累積釋藥率。
　　 結果：采用上述無

4、水乳化法制備的貝伐單抗-PLGA微粒大小較為均勻(粒徑2～7μm)、表面光滑圓整。整個操作過程比較簡單，且添加劑具有生物兼容性，對人體沒有威脅。用酶聯(lián)免疫測定法(ELISA)測定微球的包封率約49％，載藥量約10%，該載荷貝伐單抗的微球的體外釋藥結果顯示其體外釋藥過程較為穩(wěn)定．第1天突釋貝伐單抗達到20.1%，第3天達到34.6%，第7天達到63%，從第14天起達到87%，第28d達到90%，可以認為在14天時微球中藥物已基本徹底釋出，