白僵菌對(duì)小菜蛾、棉鈴蟲(chóng)的毒力比較及侵染機(jī)制差異性研究.pdf

1、球孢白僵菌(Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin)是目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用最廣泛的昆蟲(chóng)病原真菌之一，能侵染15個(gè)目149個(gè)科的700多種昆蟲(chóng)，不同白僵菌菌株對(duì)不同昆蟲(chóng)的致病力存在很大差異。本研究以在不同寄主中分離純化得到的白僵菌菌株HFW-05、TE-07、Lu-08、Dj-04為供試菌株，明確了四株供試菌株的種間分類和酯酶型、生物學(xué)特征；測(cè)定了四菌株對(duì)鱗翅目害蟲(chóng)小菜蛾、棉鈴蟲(chóng)的毒力；通過(guò)掃描電鏡觀察了不

2、同菌株分生孢子在同種昆蟲(chóng)和相同菌株分生孢子在不同昆蟲(chóng)的表皮侵染；在此基礎(chǔ)上，明確了三種酶對(duì)菌株在表皮侵染過(guò)程中的作用，并克隆了四株白僵菌的幾丁質(zhì)酶基因。
　　 通過(guò)對(duì)四株球孢白僵菌ITS 區(qū)序列和酯酶同工酶圖譜分析，結(jié)果表明四株白僵菌為球孢白僵菌種下的不同酯酶型。測(cè)定四菌株對(duì)小菜蛾和棉鈴蟲(chóng)2 齡幼蟲(chóng)的毒力，結(jié)果表明，HFW-05菌株對(duì)小菜蛾致病力較高，6 d后校正死亡率為87.14％，其余三株均不高于40％，四菌株對(duì)棉鈴蟲(chóng)6 d

3、后校正死亡率均低于15％。
　　 掃描電鏡觀察顯示：分生孢子在小菜蛾、棉鈴蟲(chóng)體表的附著部位相似，多附著在凹陷部位、剛毛窩處、褶皺處、體壁嵴狀突起之間，體壁的光滑部位分布較少。四菌株分生孢子在小菜蛾表皮附著12h后均可萌發(fā)，高致病力HFW-05菌株孢子萌發(fā)后直接穿透寄主表皮或產(chǎn)生較短穿透芽管，萌芽管貼于表皮生長(zhǎng)，有些萌芽管末端彎曲指向表皮，在附著后16 h，萌芽管發(fā)生定向生長(zhǎng)、垂直向里穿透表皮；其余三株低毒力菌株分生孢子的萌發(fā)、萌

4、芽管的生長(zhǎng)行為相似，只是萌芽管在穿透表皮之前伸的較長(zhǎng)。供試菌株孢子在棉鈴蟲(chóng)表皮均能萌發(fā)，但萌芽管呈蔓延生長(zhǎng)無(wú)法穿透寄主表皮，感染36 h后的試蟲(chóng)表皮可觀察到芽生孢子。結(jié)果表明菌株毒力大小與分生孢子在寄主體表的附著能力無(wú)直接相關(guān)性，但與萌芽管能否穿透表皮以及穿透時(shí)的伸長(zhǎng)長(zhǎng)度密切相關(guān)。
　　 用脂肪酶、蛋白酶K、幾丁質(zhì)酶三種單一酶液和脂肪酶+蛋白酶、脂肪酶+幾丁質(zhì)酶、蛋白酶+幾丁質(zhì)酶、脂肪酶+蛋白酶+幾丁質(zhì)酶四種復(fù)合酶液分別處理2

5、齡小菜蛾、棉鈴蟲(chóng)后，測(cè)定低毒力菌株對(duì)目標(biāo)昆蟲(chóng)的毒力變化。結(jié)果顯示，菌株對(duì)酶液處理后的試蟲(chóng)毒力均有一定程度的提高，其中對(duì)幾丁質(zhì)酶和含幾丁質(zhì)酶的復(fù)合酶液處理后的小菜蛾和棉鈴蟲(chóng)毒力提高最明顯。對(duì)小菜蛾6 d 相對(duì)死亡率在單一酶液處理之間差異呈極顯著（F=15.955，P<0.01），其中幾丁質(zhì)酶處理后Lu-08菌株的死亡率是對(duì)照組的2.9倍，毒力提高最明顯，脂肪酶處理后Dj-04菌株毒力為對(duì)照組的1.15倍；棉鈴蟲(chóng)經(jīng)三種單一酶液處理后，6 d

6、后相對(duì)死亡率在酶處理之間差異性顯著（F=17.695，P<0.05），菌株對(duì)幾丁質(zhì)酶處理后的棉鈴蟲(chóng)毒力提高最明顯，菌株HFW-05、TE-07、Lu-08、Dj-04的死亡率分別為對(duì)照組的4.52、5.55、37.33、17.12倍。這在一定程度上反映出供試菌株分生孢子在穿透小菜蛾和棉鈴蟲(chóng)體壁過(guò)程中，幾丁質(zhì)酶與供試菌株毒力相關(guān)性更顯著。
　　 克隆四菌株幾丁質(zhì)酶基因并測(cè)序，幾丁質(zhì)酶基因的序列完全相同，編碼區(qū)包括1047bp，編碼