川芎嗪聯(lián)合超聲微泡介導內(nèi)皮祖細胞移植治療大鼠心肌梗死的研究.pdf

1、第一部分內(nèi)皮祖細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定
　　目的：體外分離、培養(yǎng)、鑒定大鼠骨髓來源的內(nèi)皮祖細胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)，并誘導分化成為成熟血管內(nèi)皮細胞。
　　方法：無菌分離大鼠四肢長骨，取骨髓沖洗液，Percoll密度梯度離心法分離單個核細胞，接種于人纖維連結(jié)蛋白(human fibronection，HFN)鋪被的培養(yǎng)瓶，用加入人表皮生長因子(epidermal growth f

2、actor，EGF)、大鼠血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、人堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，對其進行細胞形態(tài)學，免疫細胞化學，流式細胞術(shù)，透射電鏡，以及Dil-acLDL、FITC-UEA-1雙熒光染色的檢測。
　　結(jié)果：可以從骨髓中分離出大量EPCs，且細胞增殖能力強，連續(xù)傳代四次

3、，細胞活性不降低。鏡下觀察隨時間變化，細胞依次呈現(xiàn)圓形，橢圓形，梭形，條索形等形態(tài)，細胞集落生長并可呈網(wǎng)狀、旋渦狀生長后期呈典型的鋪路石樣形態(tài)。通過細胞免疫組織化學染色和流式細胞術(shù)發(fā)現(xiàn)，細胞表面標志物在不同時期表達率不同，其中CD133早期表達率高，隨培養(yǎng)時間延長，表達率降低。透射電鏡檢查，后期細胞胞漿中發(fā)現(xiàn)W-P小體。激光共聚焦顯微鏡觀察，Dil-acLDL、FITC-UEA-1雙染。
　　結(jié)論：密度梯度離心法，可以獲得大量單個

4、核細胞，經(jīng)選擇性完全培養(yǎng)基培養(yǎng)可獲純度較高的。EPCs，并可在體外誘導分化成血管內(nèi)皮細胞。
　　第二部分川芎嗪聯(lián)合超聲微泡介導內(nèi)皮祖細胞治療大鼠心肌梗死
　　目的：探討在川芎嗪聯(lián)合超聲微泡的輔助下，內(nèi)皮祖細胞移植可否更好歸巢大鼠缺血心肌，達到治療心肌梗死的效果。
　　方法：大鼠心肌梗死模型制備：永久結(jié)扎冠狀動脈左前降支。隨機分為5個組：
　　(1)川芎嗪+EPCs+超聲微泡組。
　　(2)川芎嗪+EPCs組

5、。
　　(3)EPCs組。
　　(4)空白對照組。
　　(5)單純心肌梗死組。
　　建模后第三天，經(jīng)經(jīng)尾靜脈輸入川芎嗪+EPCs+超聲微泡混合液，同時超聲轉(zhuǎn)染治療儀輻照大鼠心前區(qū)。細胞移植35d)舌M型超聲心動圖檢測LVEF及FS以評價心功能，免疫組織化學法行5-溴脫氧尿嘧啶核酸(5-bromodeoxyuridine，5-Brdu)及血管內(nèi)皮細胞粘附因子(Vascular cell adhere moldcul