Toehold介導(dǎo)鏈置換和銀納米簇技術(shù)在生物和環(huán)境檢測中的初步應(yīng)用.pdf

1、隨著社會進步和生活水平的提高，人們對健康要求越來越高。我們知道，生物大分子參與許多重要的生物過程。一些生物大分子的改變可能預(yù)示著某些生理過程不可逆地轉(zhuǎn)變或疾病的發(fā)生，同時，影響健康的還有環(huán)境因素，尤其是環(huán)境中重金屬對人具有極強的危害作用，即使是以痕量形式存在。因此，對于生物分子和環(huán)境重金屬的檢測在疾病診斷，環(huán)境安全等民生領(lǐng)域具有極為重要的意義。目前，Toe hold介導(dǎo)的鏈置換技術(shù)因其操作簡便，成本適中，在生物計算機和生物分子檢測中受到

2、極大關(guān)注；而銀納米簇合成技術(shù)因其高的量子產(chǎn)率和良好的光穩(wěn)定性，在新材料合成及樣品分析中顯得越來越重要。基于此，本論文利用To e ho ld介導(dǎo)的鏈置換和銀納米簇技術(shù)，研制新型生物大分子和重金屬檢測體系并進行了初步應(yīng)用研究。具體工作如下：
　　1、建立了To e ho ld介導(dǎo)的鏈置換-微球捕獲的點突變熒光檢測方法。許多遺傳性疾病的發(fā)生發(fā)展與點突變密切相關(guān)，點突變的準確檢測對這些疾病的預(yù)防、臨床檢測和分子診斷有重大意義。目前基于熒

3、光偏正等技術(shù)的To e ho ld介導(dǎo)鏈置換方法能快速實現(xiàn)點突變檢測，但是需要昂貴的熒光偏正等檢測系統(tǒng)。本論文基于To e ho ld介導(dǎo)的鏈置換技術(shù)和微球介導(dǎo)的捕獲技術(shù)，設(shè)計了一種新的檢測體系，實現(xiàn)了點突變準確快速的研究。該方法能對各種點突變類型進行檢測，而且操作簡便，不需要昂貴儀器，也不需要電泳、離心、分離、加酶等復(fù)雜繁瑣的步驟，有望在臨床檢測和應(yīng)用上發(fā)揮重要作用。
　　2、建立了基于G-rich的銀納米簇信號放大的核酸外切酶

4、(Exo nuc lease I)的檢測方法。Exonuc lease I酶從核苷酸鏈的一端開始逐個水解核苷酸，在分析核酸的結(jié)構(gòu)差異，測定基因組 DN A中的特定位點及某些重要的生物過程中具有重要意義。傳統(tǒng)檢測酶的凝膠電泳、比色法、放射性標記法以及酶聯(lián)免疫吸附沉淀法等方法，往往需要復(fù)雜操作過程或昂貴設(shè)備。本論文基于G-r ic h能極大增強銀納米簇熒光信號的特點，建立了一種新型的酶檢測體系，實現(xiàn)Exonuc lease I的快速靈敏檢測

5、。該方法的靈敏度為0.05U/mL，而且具有較好的檢測特異性，不需要復(fù)雜繁瑣的操作和昂貴的儀器設(shè)備，為蛋白質(zhì)酶的分析研究提供了一種好的檢測策略，同時為酶活性的抑制劑篩選提供了一種有效的方法。
　　3、建立了To e ho ld介導(dǎo)鏈置換-銀納米簇的汞離子檢測方法。汞離子對于人類的健康和環(huán)境有著嚴重危害，檢測環(huán)境中汞離子的含量對于人類生態(tài)治理、污水排放、工業(yè)和生活用水等各方面都有著重要意義。傳統(tǒng)的汞離子主要是基于光譜或質(zhì)譜的檢測方法