Toehold介導(dǎo)鏈置換和銀納米簇技術(shù)在生物和環(huán)境檢測(cè)中的初步應(yīng)用.pdf

1、隨著社會(huì)進(jìn)步和生活水平的提高，人們對(duì)健康要求越來(lái)越高。我們知道，生物大分子參與許多重要的生物過(guò)程。一些生物大分子的改變可能預(yù)示著某些生理過(guò)程不可逆地轉(zhuǎn)變或疾病的發(fā)生，同時(shí)，影響健康的還有環(huán)境因素，尤其是環(huán)境中重金屬對(duì)人具有極強(qiáng)的危害作用，即使是以痕量形式存在。因此，對(duì)于生物分子和環(huán)境重金屬的檢測(cè)在疾病診斷，環(huán)境安全等民生領(lǐng)域具有極為重要的意義。目前，Toe hold介導(dǎo)的鏈置換技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便，成本適中，在生物計(jì)算機(jī)和生物分子檢測(cè)中受到

2、極大關(guān)注；而銀納米簇合成技術(shù)因其高的量子產(chǎn)率和良好的光穩(wěn)定性，在新材料合成及樣品分析中顯得越來(lái)越重要?；诖?，本論文利用To e ho ld介導(dǎo)的鏈置換和銀納米簇技術(shù)，研制新型生物大分子和重金屬檢測(cè)體系并進(jìn)行了初步應(yīng)用研究。具體工作如下：
　　1、建立了To e ho ld介導(dǎo)的鏈置換-微球捕獲的點(diǎn)突變熒光檢測(cè)方法。許多遺傳性疾病的發(fā)生發(fā)展與點(diǎn)突變密切相關(guān)，點(diǎn)突變的準(zhǔn)確檢測(cè)對(duì)這些疾病的預(yù)防、臨床檢測(cè)和分子診斷有重大意義。目前基于熒

3、光偏正等技術(shù)的To e ho ld介導(dǎo)鏈置換方法能快速實(shí)現(xiàn)點(diǎn)突變檢測(cè)，但是需要昂貴的熒光偏正等檢測(cè)系統(tǒng)。本論文基于To e ho ld介導(dǎo)的鏈置換技術(shù)和微球介導(dǎo)的捕獲技術(shù)，設(shè)計(jì)了一種新的檢測(cè)體系，實(shí)現(xiàn)了點(diǎn)突變準(zhǔn)確快速的研究。該方法能對(duì)各種點(diǎn)突變類型進(jìn)行檢測(cè)，而且操作簡(jiǎn)便，不需要昂貴儀器，也不需要電泳、離心、分離、加酶等復(fù)雜繁瑣的步驟，有望在臨床檢測(cè)和應(yīng)用上發(fā)揮重要作用。
　　2、建立了基于G-rich的銀納米簇信號(hào)放大的核酸外切酶

4、(Exo nuc lease I)的檢測(cè)方法。Exonuc lease I酶從核苷酸鏈的一端開(kāi)始逐個(gè)水解核苷酸，在分析核酸的結(jié)構(gòu)差異，測(cè)定基因組 DN A中的特定位點(diǎn)及某些重要的生物過(guò)程中具有重要意義。傳統(tǒng)檢測(cè)酶的凝膠電泳、比色法、放射性標(biāo)記法以及酶聯(lián)免疫吸附沉淀法等方法，往往需要復(fù)雜操作過(guò)程或昂貴設(shè)備。本論文基于G-r ic h能極大增強(qiáng)銀納米簇?zé)晒庑盘?hào)的特點(diǎn)，建立了一種新型的酶檢測(cè)體系，實(shí)現(xiàn)Exonuc lease I的快速靈敏檢測(cè)

5、。該方法的靈敏度為0.05U/mL，而且具有較好的檢測(cè)特異性，不需要復(fù)雜繁瑣的操作和昂貴的儀器設(shè)備，為蛋白質(zhì)酶的分析研究提供了一種好的檢測(cè)策略，同時(shí)為酶活性的抑制劑篩選提供了一種有效的方法。
　　3、建立了To e ho ld介導(dǎo)鏈置換-銀納米簇的汞離子檢測(cè)方法。汞離子對(duì)于人類的健康和環(huán)境有著嚴(yán)重危害，檢測(cè)環(huán)境中汞離子的含量對(duì)于人類生態(tài)治理、污水排放、工業(yè)和生活用水等各方面都有著重要意義。傳統(tǒng)的汞離子主要是基于光譜或質(zhì)譜的檢測(cè)方法