兒童腸道分節(jié)絲狀菌(SFB)年齡分布特征及其與腸黏膜免疫關(guān)系初探.pdf

1、背景:
　　分節(jié)絲狀菌（Segmented Filamentous Bacterium，SFB）一種革蘭氏陽(yáng)性、產(chǎn)芽孢厭氧菌，廣泛存在于多種脊椎動(dòng)物及無(wú)脊椎動(dòng)物腸道內(nèi)的一類形態(tài)結(jié)構(gòu)特異的“原著”細(xì)菌。這種細(xì)菌與宿主的免疫成熟息息相關(guān)，它能促進(jìn)宿主分泌型免疫球蛋(sIgA)的分泌、調(diào)控T細(xì)胞的分化和平衡、誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的分化、抵抗外來(lái)致病菌的感染。由于SFB難以在體外培養(yǎng)，所以其研究結(jié)果多通過(guò)單一定植的動(dòng)物模型，如大鼠、小鼠、雞等

2、獲得。通過(guò)單一定植SFB的動(dòng)物模型研究發(fā)現(xiàn)SFB能明顯促進(jìn)腸腔sIgA分泌、誘導(dǎo)Th17細(xì)胞的分化，兩者均是局部腸道黏膜免疫屏障重要功能分子。sIgA能抑制腸道內(nèi)的細(xì)菌黏附腸道黏膜表面，中和腸道內(nèi)的毒素、酶和病毒，對(duì)一些抗原物質(zhì)具有封閉作用，同時(shí)具有對(duì)嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞脫顆粒作用和ADCC作用（抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用）;Th17細(xì)胞在適當(dāng)濃度下能阻止黏膜表面免受細(xì)菌及真菌的感染。同時(shí)SFB的定植能通過(guò)調(diào)控Treg細(xì)胞的

3、分化，防止Th17細(xì)胞過(guò)度分化引起的自身免疫性反應(yīng)。多項(xiàng)研究表明SFB在動(dòng)物（如小鼠、大鼠和雞）腸道中定植存在年齡依賴關(guān)系，但SFB在人類腸道中的定植、分布及對(duì)宿主免疫系統(tǒng)影響的研究非常少。
　　目的:
　　比較各年齡段兒童腸道SFB分布特征;通過(guò)腸液中sIgA測(cè)定及回腸末端黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞及Th細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的免疫組化檢測(cè)，初步分析人腸道SFB定植與腸道黏膜免疫關(guān)系。
　　方法:
　　1.兒童腸道SFB年

4、齡分布特征:2013年11月-2014年1月期間在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院住院的非胃腸道疾病、非感染性疾病的外科疾病患兒作為研究對(duì)象，排除抗生素及微生態(tài)制劑的應(yīng)用。共收集177例患兒的新鮮糞便，通過(guò)提取糞便DNA，從GenBank中獲取SFB序列，根據(jù)細(xì)菌的16SrRNA/DNA特異性基因序列，設(shè)計(jì)其特異性引物，進(jìn)一步通過(guò)real-time PCR定量分析確定是否存在SFB，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　2.SFB與腸黏膜免疫關(guān)系初步

5、研究:2012年10月-2014年6月期間在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院行腸鏡檢查未發(fā)現(xiàn)異常的患兒作為研究對(duì)象。收集回盲部新鮮腸液，測(cè)定腸液中sIgA濃度，并行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析;對(duì)腸鏡檢查時(shí)能取得回腸末端黏膜標(biāo)本的患兒，通過(guò)免疫組化方法，測(cè)定回腸末端黏膜IL-17A細(xì)胞、上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量，及與Th1細(xì)胞、Th17細(xì)胞、Treg細(xì)胞等細(xì)胞分化相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)，初步分析SFB與腸黏膜免疫功能的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　1.人腸道SFB

6、年齡分布特征:177例患兒糞便中檢測(cè)到SFB34例，陽(yáng)性率為19.2％;不同年齡者SFB陽(yáng)性率不同，0-1歲、1-2歲、2-3歲、3-4歲、4-5歲、5-6歲、6-7歲、7-15歲依次為40.0％、47.4％、31.6％、15.0％、11.8％、13.3％、15.4％、3.7％，根據(jù)Spearman相關(guān)性檢測(cè)，近似值T=-5.095，P＜0.001，顯示SFB主要定植于3歲以內(nèi)的嬰幼兒腸道。
　　2.人腸道SFB與sIgA關(guān)系:S

7、FB陽(yáng)性組24例和SFB陰性組23例，結(jié)果顯示SFB陽(yáng)性患兒的腸液sIgA濃度明顯高于SFB陰性患兒，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.人腸道SFB與腸黏膜免疫細(xì)胞及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的關(guān)系:SFB陽(yáng)性組12例和SFB陰性組11例，結(jié)果顯示SFB陽(yáng)性組回腸末端黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量與SFB陰性組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而SFB陽(yáng)性組回腸末端黏膜IL-17A細(xì)胞數(shù)量明顯低于SFB陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與Th1