稀土鑭化合物抗宮頸癌效應(yīng)的體外研究.pdf

1、目的：探討稀土鑭化合物對(duì)體外培養(yǎng)的人宮頸癌細(xì)胞增殖，遷移和侵襲能力的影響，尋找新的有效拮抗富頸癌的藥物，為稀土運(yùn)用于宮頸癌的治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：⑴宮頸癌細(xì)胞株HeLa細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、傳代后分為兩組，即實(shí)驗(yàn)組(培養(yǎng)基中含有5、50、100μmol/L的氯化鑭)和對(duì)照組(培養(yǎng)基中不含氯化鑭)。⑵倒置顯微鏡下觀察兩組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，激光共聚焦顯微鏡觀察兩組細(xì)胞的形態(tài)變化。⑶MTT法觀察不同劑量的氯化鑭(5，50，100μmol

2、/L)對(duì)體外培養(yǎng)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。⑷以雙標(biāo)染色，流式細(xì)胞術(shù)分析氯化鑭對(duì)Hela細(xì)胞凋亡的影響。⑸以Transwell小室法觀察氯化鑭對(duì)宮頸癌細(xì)胞遷移能力的影響。⑹細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)觀察氯化鑭對(duì)宮頸癌細(xì)胞侵襲能力的影響。⑺RT-PCR法分析氯化鑭對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞中增殖、抗凋亡、遷移和侵襲相關(guān)基因細(xì)胞周期蛋白cyclinD1、鋅指蛋白A20及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9表達(dá)的影響。⑻以細(xì)胞免疫熒光法檢測(cè)并在激光共聚焦顯微鏡下觀察氯化鑭對(duì)

3、宮頸癌Hela細(xì)胞中cyclinD1蛋白的表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：①倒置顯微鏡下觀察：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞隨著氯化鑭濃度的增高，細(xì)胞密度逐漸降低，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顆粒逐漸增多，顏色加深，細(xì)胞間隙增大，少量細(xì)胞變圓漂浮，脫落細(xì)胞也逐漸增多；而對(duì)照組細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)密集，形態(tài)清晰，胞質(zhì)飽滿，相鄰細(xì)胞生長(zhǎng)融合成片。激光共聚焦顯微鏡觀察：實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞核染色質(zhì)濃聚、邊集，核體積變小，隨著氯化鑭濃度的增高，核染色質(zhì)崩解，核膜破裂，核碎裂，直至細(xì)胞核完全碎裂；而對(duì)

4、照組細(xì)胞核飽滿，核膜完整。②氯化鑭(5，50，100μmol/L)對(duì)HeLa細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率分別為24％，51％，78％，均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。③經(jīng)Annexin V-FITC/PI雙標(biāo)染色分析，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率(％)分別為(4.91±0.39)％、(7.30±0.71)％、(13.48±0.92)％，高于對(duì)照組的(0.89±0.11)％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。④細(xì)胞遷移能力檢測(cè)結(jié)果表明，經(jīng)5，50和100μm

5、ol/L氯化鑭分別作用24h后，穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(22.25±4.35)、(12.00±3.16)、(7.75±2.63)個(gè)，低于對(duì)照組的(41.25±5.38)個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。⑤細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)結(jié)果表明，經(jīng)氯化鑭分別作用24h后，穿膜細(xì)胞數(shù)分別為(11.00±1.41)、(2.25±1.71)、(0.75±0.96)個(gè)，低于對(duì)照組的(22.50±1.71)個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。⑥RT-PCR結(jié)果表