稀土鑭化合物抗宮頸癌效應的體外研究.pdf

1、目的：探討稀土鑭化合物對體外培養(yǎng)的人宮頸癌細胞增殖，遷移和侵襲能力的影響，尋找新的有效拮抗富頸癌的藥物，為稀土運用于宮頸癌的治療提供實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴宮頸癌細胞株HeLa細胞經(jīng)培養(yǎng)、傳代后分為兩組，即實驗組(培養(yǎng)基中含有5、50、100μmol/L的氯化鑭)和對照組(培養(yǎng)基中不含氯化鑭)。⑵倒置顯微鏡下觀察兩組細胞的生長情況，激光共聚焦顯微鏡觀察兩組細胞的形態(tài)變化。⑶MTT法觀察不同劑量的氯化鑭(5，50，100μmol

2、/L)對體外培養(yǎng)HeLa細胞生長的抑制作用。⑷以雙標染色，流式細胞術分析氯化鑭對Hela細胞凋亡的影響。⑸以Transwell小室法觀察氯化鑭對宮頸癌細胞遷移能力的影響。⑹細胞侵襲實驗觀察氯化鑭對宮頸癌細胞侵襲能力的影響。⑺RT-PCR法分析氯化鑭對宮頸癌Hela細胞中增殖、抗凋亡、遷移和侵襲相關基因細胞周期蛋白cyclinD1、鋅指蛋白A20及基質金屬蛋白酶MMP-9表達的影響。⑻以細胞免疫熒光法檢測并在激光共聚焦顯微鏡下觀察氯化鑭對

3、宮頸癌Hela細胞中cyclinD1蛋白的表達的影響。
　　 結果：①倒置顯微鏡下觀察：實驗組細胞隨著氯化鑭濃度的增高，細胞密度逐漸降低，細胞質內顆粒逐漸增多，顏色加深，細胞間隙增大，少量細胞變圓漂浮，脫落細胞也逐漸增多；而對照組細胞貼壁生長密集，形態(tài)清晰，胞質飽滿，相鄰細胞生長融合成片。激光共聚焦顯微鏡觀察：實驗組細胞核染色質濃聚、邊集，核體積變小，隨著氯化鑭濃度的增高，核染色質崩解，核膜破裂，核碎裂，直至細胞核完全碎裂；而對

4、照組細胞核飽滿，核膜完整。②氯化鑭(5，50，100μmol/L)對HeLa細胞生長的抑制率分別為24％，51％，78％，均顯著高于對照組(P<0.05)。③經(jīng)Annexin V-FITC/PI雙標染色分析，各實驗組細胞凋亡率(％)分別為(4.91±0.39)％、(7.30±0.71)％、(13.48±0.92)％，高于對照組的(0.89±0.11)％，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。④細胞遷移能力檢測結果表明，經(jīng)5，50和100μm

5、ol/L氯化鑭分別作用24h后，穿膜細胞數(shù)分別為(22.25±4.35)、(12.00±3.16)、(7.75±2.63)個，低于對照組的(41.25±5.38)個，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。⑤細胞侵襲能力檢測結果表明，經(jīng)氯化鑭分別作用24h后，穿膜細胞數(shù)分別為(11.00±1.41)、(2.25±1.71)、(0.75±0.96)個，低于對照組的(22.50±1.71)個，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。⑥RT-PCR結果表