基于新型發(fā)光納米材料標(biāo)記的沙門氏菌檢測方法研究.pdf

1、隨著人們對食品安全問題的關(guān)注日益增長,對食品安全檢測技術(shù)的發(fā)展提出了更高的要求,要求檢測技術(shù)能夠更簡單、快速、靈敏和高效。21世紀(jì)飛速發(fā)展的納米技術(shù)和生物技術(shù)將納米材料引入生物探針和傳感領(lǐng)域,利用納米材料構(gòu)建納米探針和傳感器,可有效提高分析測定中靈敏度、穩(wěn)定性等分析性能。目前常用的生物分析標(biāo)記物主要有酶或底物、熒光染料等一些熒光物質(zhì)。但這些傳統(tǒng)生物分析標(biāo)記物因其固有的缺陷,在很大程度上限制其發(fā)展和應(yīng)用。上轉(zhuǎn)換納米材料是一種特殊的熒光納米

2、材料,具有將長波輻射轉(zhuǎn)換成短波輻射,發(fā)射出比激發(fā)光波長短的熒光的特點。同時上轉(zhuǎn)換納米材料還具有毒性低、化學(xué)穩(wěn)定性高、發(fā)光強度高而穩(wěn)定、Stokes位移大等一系列優(yōu)點,使其受到了眾多研究者的廣泛關(guān)注,成為熒光納米材料中發(fā)展前景極好的一種納米材料。
　　 本文首先以氧化釔,氧化鐿,氧化鉺等為原料,在較溫和的條件下制備粒徑大小為50 nm、親水性、光穩(wěn)定性俱佳的上轉(zhuǎn)換發(fā)光納米顆粒。采用TEM、XRD、FT-IR、熒光光譜等對其進行了表

3、征,隨后對納米材料的表面進行功能化修飾,成功制備了表面氨基修飾的上轉(zhuǎn)換納米顆粒。同時制備了結(jié)晶度高、尺寸均勻、表面功能化、具有良好水溶性的磁性納米顆粒,同樣對其進行表面生物功能化,以便應(yīng)用于痕量核酸的磁分離與富集研究。
　　 其次,將所制備上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒作為發(fā)光標(biāo)記物,磁性納米顆粒作為高效分離介質(zhì),基于納米探針技術(shù)、核酸雜交技術(shù)和熒光分析技術(shù),發(fā)展一種革蘭氏陰性菌沙門氏菌特異性目標(biāo)DNA的快速靈敏的檢測方法。研究發(fā)現(xiàn),在最佳

4、實驗條件下,熒光強度和沙門氏菌DNA濃度在0.01-10 pmol／L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,檢出限為3 fmol／L,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.6％(1 pmol／L,n=11)。該方法體系已成功應(yīng)用于實際樣品中沙門氏菌的檢測。
　　 再次,基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)原理,將所制備上轉(zhuǎn)換熒光納米顆粒作為標(biāo)記物,納米金作為能量接受淬滅劑,發(fā)展一種均相體系中沙門氏菌特異性目標(biāo)DNA的熒光檢測方法。研究發(fā)現(xiàn),在最佳實驗條件下,熒光強度