鉤狀木霉生物還原制備納米銀的研究.pdf

1、本實驗采用在土壤懸液中添加Ag+的方法在東北林業(yè)大學(xué)帽兒山林場土壤中篩選出能合成納米銀的真菌菌株，通過形態(tài)學(xué)特征觀察及分子生物學(xué)方法對菌株進行鑒定;利用真菌合成納米銀，采用UV-vis，TEM、XRD及FTIR等手段對納米銀進行表征;以大腸桿菌和枯草芽孢桿菌為受試菌株，對納米銀的殺菌性能進行初步測定;利用SDS-PAGE電泳技術(shù)分析真菌胞外濾液的蛋白變化及納米銀表面附著蛋白，對納米銀的合成機理進行初步探討。
　　(1)合成納米銀真

2、菌的篩選及鑒定
　　采用在土壤懸液中添加Ag+的方法篩選出能合成納米銀的真菌NYZJ03并對其進行鑒定。PDA固體培養(yǎng)基上的NYZJ03菌絲為白色，基質(zhì)為黃色;菌落生長較緩慢，表面光滑，氣生菌絲較少;菌絲具有明顯的分枝，較為密集，間隔明顯且很有規(guī)律，大約為5μm左右;不能明顯的看到細胞核。NYZJ03特異性ITS基因序列長度為577 bp，在GenBank中的Accession No.是KM054532;系統(tǒng)發(fā)育樹顯示菌株NYZJ

3、03與鉤狀木霉形成一個族群，同源性達99.5％以上。根據(jù)菌株的菌落特征、菌絲形態(tài)和ITS基因序列分析，初步將該菌鑒定為鉤狀木霉（Trichoderma hamatum）。NYZJ03保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC No.9333。
　　(2)納米銀的合成及表征
　　采用菌體與AgNO3混合培養(yǎng)的方法合成納米銀并利用紫外全波長掃描(UV-vis)、X射線衍射分析(XRD)、

4、透射電子顯微鏡(TEM)、能量色譜分析(EDS)及傅里葉變換紅外分析(FTIR)等手段對納米銀進行表征;熱重分析法和原子光譜吸收法分別對納米銀的產(chǎn)率和Ag+轉(zhuǎn)化率進行測定和計算。結(jié)果顯示納米銀納為面心立方結(jié)構(gòu)，結(jié)晶程度較好且很純凈;納米銀具有單分散性，無團聚現(xiàn)象，多數(shù)為近球形，絕大多數(shù)小于9nm，平均為6.69nm; FTIR結(jié)果表明納米銀可能被蛋白或多肽等生物大分子包裹;熱重分析結(jié)果顯示納米銀的產(chǎn)率為67.12％，而原子光譜吸收的結(jié)果

5、顯示Ag+的轉(zhuǎn)化率為84.41％。
　　(3)納米銀殺菌性能研究及合成機理的探討
　　納米銀對大腸桿菌的MBC為10μg/mL，MIC為7μg/mL，而對枯草芽孢桿菌的MBC為5μg/mL，MIC為4μg/mL。10μg/mL的納米銀對大腸桿菌的致死率開始時較低，40min明顯增大，達到86.70％，到70min時，達到99.23％，已經(jīng)基本被殺死。5μg/mL的納米銀對枯草芽孢桿菌的致死率在40min時已經(jīng)達到96.22％