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文檔簡介
1、活體細胞對刺激信號的響應(yīng)反映在多種細胞參數(shù)的變化,例如細胞代謝,動作電位和細胞阻抗變化等。細胞傳感器(Cell-based Biosensors,CBB)利用活體細胞作為傳感單元,通過二級換能器將細胞響應(yīng)參數(shù)轉(zhuǎn)換為電學(xué)信號進行檢測。光尋址細胞傳感器(Light addressable cell-based biosensors,LACBB)作為一種特殊的細胞傳感器,利用光尋址電位傳感器(Light addressable potenti
2、ometric sensor,LAPS)作為二級換能器,利用激光進行細胞尋址,能有效解決其他類型細胞傳感器需定位培養(yǎng)細胞的難點。
本文從細胞傳感器設(shè)計和儀器制作等關(guān)鍵技術(shù)入手,對基于LAPS的多功能光尋址細胞傳感器在檢測細胞阻抗,胞外電位和胞外微環(huán)境中的應(yīng)用進行了研究:結(jié)合阻抗檢測技術(shù)和LAPS技術(shù),提出了一種光尋址細胞阻抗傳感器(Light addressable cell impedance sensor,LACIS)
3、,用以檢測細胞貼附阻抗特性;結(jié)合LAPS胞外電位檢測技術(shù)和干細胞技術(shù)設(shè)計了干細胞分化的心肌細胞芯片并將其用于藥物篩選;將胞外電位和離子檢測結(jié)合,實現(xiàn)了能同時檢測細胞電生理參數(shù)和代謝參數(shù)的LAPS細胞傳感器;最后,結(jié)合LAPS離子檢測技術(shù)和儀器開發(fā)技術(shù),設(shè)計并完成了能夠?qū)崟r檢測多種細胞代謝參數(shù)的細胞微環(huán)境檢測儀。本文的創(chuàng)新點和貢獻在于:
1.提出了一種基于LAPS的光尋址檢測細胞阻抗的方法。
細胞阻抗可以反映細
4、胞的遷移、增殖、衰亡等生理過程,是一種重要的細胞生理參數(shù)。傳統(tǒng)細胞阻抗檢測采用金屬電極進行,反應(yīng)的是與電極接觸的所有細胞阻抗的平均值。本文采用電解液-絕緣層-半導(dǎo)體(EIS)結(jié)構(gòu)器件,結(jié)合LAPS的光尋址原理以及電化學(xué)阻抗檢測技術(shù),首次提出了一種光尋址檢測細胞阻抗的方法,通過激光對細胞進行尋址,檢測光照區(qū)域的局部細胞阻抗變化而非全部細胞的平均阻抗變化。這種細胞阻抗檢測方法更適用于少量細胞甚至單細胞的檢測,也可以應(yīng)用于細胞阻抗成像。
5、> 2.提出了基于LAPS的干細胞分化的心肌細胞芯片設(shè)計方法并應(yīng)用于藥物篩選
利用小鼠胚胎干細胞作為新型細胞來源并優(yōu)化LAPS傳感器結(jié)構(gòu),設(shè)計并實現(xiàn)了LAPS干細胞分化的心肌細胞芯片用于細胞電生理的檢測。將干細胞誘導(dǎo)分化為心肌細胞后,通過LAPS檢測得到穩(wěn)定的胞外動作電位信號,并分析了四種藥物作用對心肌細胞電生理的影響。基于LAPS的干細胞分化的心肌細胞芯片研究可以有效解決傳統(tǒng)胞外電位檢測傳感器如微電極陣列(Micr
6、o-electrode array,MEA),場效應(yīng)晶體管(Field effect transistor,F(xiàn)ET)等,在細胞定位培養(yǎng)上的難點,并且驗證了干細胞可以作為細胞傳感器的新型細胞來源。
3.提出了基于LAPS的多功能細胞傳感器的設(shè)計方法,實現(xiàn)了心肌細胞電位和胞外離子的多功能檢測。
為了能更準確的描述外界刺激作用下細胞的生理狀態(tài)響應(yīng),需要對多種生理活動進行評價,因此開發(fā)能檢測多種細胞生理參數(shù)的細胞傳感
7、器具有重要的意義。本文設(shè)計了一種基于LAPS的多功能細胞傳感器,以心肌細胞為例,實現(xiàn)了對胞外電位和胞外酸化率的同時檢測,用以同時表征細胞的電生理狀態(tài)和代謝水平。
4.共同完成了細胞微環(huán)境檢測儀器的系統(tǒng)設(shè)計和加工制作,初步實現(xiàn)了細胞微環(huán)境自動檢測的功能。
傳統(tǒng)細胞微生理計的缺點在于其檢測參數(shù)單一,儀器成本昂貴,以及難以實現(xiàn)高通量檢測?;诿舾心ぜ夹g(shù)、傳感器封裝技術(shù)、流體通路設(shè)計、檢測電路設(shè)計以及樣機加工技術(shù),本
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