基于分子生物學的肉類鑒定方法研究.pdf

1、本文建立了五種常見肉類、四種犬科動物和驢肉中摻雜牛肉的PCR方法;牛、羊肉的真實性鑒定的PCR-RFLP和TaqMan實時熒光定量PCR方法。
　　 1、分別使用設計的牛、羊、豬、雞和鴨的特異性引物對，對牛、羊、豬、雞和鴨肉的總DNA模板進行PCR擴增，得到了大小為494、716、611、259和350bp的擴增產物，又加以限制性酶切反應，證實了PCR擴增的特異性;運用這五對引物，檢測了摻雜牛、豬、雞和鴨肉的羊肉，結果顯示，該方

2、法的檢出限可以達到1％以下;進而建立了運用PCR技術準確、有效地鑒別五種常見動物肉類成分的方法。
　　 2、分別使用設計的狐貍、貉子、水貂和家犬的特異性引物對，對狐貍、貉子、水貂和家犬的總DNA模板進行PCR擴增，得到了大小為701、840、382和473bp的擴增產物，又加以限制性酶切反應，證實了PCR擴增的特異性。進而建立了運用PCR技術準確、有效地鑒別四種犬科動物的方法。
　　 3、通過設計特異性引物將目的片段DN

3、A進行擴增，建立鑒別驢肉中摻假牛肉PCR鑒別方法。分別用牛和驢的特異性引物對，對牛、驢的總DNA模板進行PCR擴增，獲得了大小為494bp和261bp的擴增產物，又加以限制性酶切反應，進一步證實了牛的PCR擴增的特異性。結果表明，該方法可以準確、有效地鑒別出驢肉和牛肉。
　　 4、通過一對通用引物對樣品DNA進行擴增后，經AluI酶切，建立了牛羊肉的PCR-RFLP快速鑒別方法。以五種純肉樣品的總DNA作為模板，均用通用引物對，

4、進行了PCR反應，均能擴增出長度為435-445bp的片段;各PCR產物經AluI進行酶切，酶切產物都符合軟件設計。結果表明，該方法可以有效從五種常見肉種中鑒別出牛、羊肉。為了研究方法對摻假牛羊肉的適用性，制成了摻雜不同比例豬肉的牛、羊肉樣品，并提取了這些樣品的總DNA，然后均用通用引物對擴增、AluI酶切，結果對于摻雜牛、羊肉樣品，都只有當豬肉摻雜比例≥30％時才有明顯的酶切條帶，僅能在一定范圍內適用，對于市場上相當一部分摻假牛羊肉不

5、適用。本研究建立的PCR-RFLP方法對于純肉的牛、羊肉真實性鑒定準確、可靠;對于摻假牛、羊肉僅能在一定范圍內適用，具有一定的參考性。
　　 5、應用五套TaqMan實時熒光定量PCR體系（引物和TaqManMGB探針）對整塊肉和碎肉進行牛羊肉真實性鑒定。檢測范圍包括牛肉中摻假豬肉，羊肉中摻假牛、豬或鴨肉。對于整塊肉，不存在以其他肉類摻假的可能，使用牛和羊的TaqMan實時熒光定量PCR體系建立了通過Ct值直接鑒別牛羊肉真實性的