抗PVY病毒轉(zhuǎn)NtBT1基因煙草的培育.pdf

1、煙草在我國是重要的經(jīng)濟作物之一，種植煙草的主要目的是收獲葉片，通過工業(yè)加工制成各種煙制品，滿足消費者需求。因此，煙草種質(zhì)的差異，直接影響著成品煙制品的品質(zhì)。與質(zhì)量好的煙制品相比，質(zhì)量差的煙制品首先在口感上大打折扣，其次質(zhì)量差的煙制品中焦油及尼古丁等含量比較多，這會對肺部造成更大的影響。
　　煙草病毒病是全世界煙草栽培區(qū)普遍存在的煙草病害之一，煙草病毒病的種類眾多，分布也比較廣。自20世紀(jì)50年代以來，煙草病毒病在世界各地開始發(fā)生危

2、害，給煙草生產(chǎn)造成了巨大的影響。
　　馬鈴薯PVY病毒是馬鈴薯Y病毒組(potyvirus)中的一種病毒，PVY病毒可侵染多種植物，其中以茄科、藜科和豆科植物受害最重。煙草馬鈴薯Y病毒病就是由馬鈴薯Y病毒(PVY)侵染煙草引起的一種系統(tǒng)性病害，該病毒病又稱“脈壞死病”、“脈帶病”等，感染該病毒的株系一般表現(xiàn)出花葉、壞死和卷葉三種癥狀。早期感染該病毒會導(dǎo)致煙草絕產(chǎn)絕收，近收獲期感染的煙草，會嚴(yán)重影響烤煙品質(zhì)。
　　為了從植物基

3、因組中發(fā)掘更多的抗PVY病毒基因用于植物抗病理論研究與育種應(yīng)用，前期實驗已對煙草感染PVY病毒后的轉(zhuǎn)錄組進行了測序與分析，發(fā)現(xiàn)了一個受PVY誘導(dǎo)顯著上調(diào)表達的基因。序列分析表明，該基因含有2個典型的結(jié)構(gòu)域:BTB結(jié)構(gòu)域和TAZ結(jié)構(gòu)域，屬于BTB-TAZ家族的成員，我們將該基因命名為NtBT1(Nicotiana tabacum BTB and TAZdomain protein1)。
　　因此，本課題通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將NtBT1基

4、因轉(zhuǎn)化到煙草主栽品種“K326”中，通過分子生物學(xué)檢測獲得了轉(zhuǎn)基因植株，經(jīng)過篩選培養(yǎng)獲得外源基因穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因煙草株系;通過對轉(zhuǎn)基因株系T1代幼苗進行抗病毒檢測，獲得抗病毒的轉(zhuǎn)基因煙草株系，為后續(xù)培育抗病毒病煙草新品系和進一步研究NtBT1基因介導(dǎo)的抗病毒機制理論研究提供轉(zhuǎn)基因材料。
　　本研究獲得的主要研究結(jié)果如下:
　　(1)克隆獲得NtBT1基因，表達特性分析發(fā)現(xiàn)其受PVY病毒誘導(dǎo)且具有組織部位和生長發(fā)育特異性。以p

5、BHT-005為載體骨架，采用PCR方法在NtBT1基因兩端添加SfiⅠ酶切位點，構(gòu)建了植物表達載體pBHT-BT1。
　　(2)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將NtBT1基因?qū)煵荨癒326”進行遺傳轉(zhuǎn)化，經(jīng)過兩次PCR檢測獲得32株P(guān)CR陽性植株;經(jīng)過RT-PCR檢測獲得30株RT-PCR陽性植株。
　　(3)隨機選取7株植株做Southern Blot檢測，其中3株為Southern Blot陽性植株。
　　(4)目前獲得4個