溶酶體酶B在多發(fā)性肌炎中的表達(dá)及其抑制劑Ca-074Me對(duì)豚鼠多發(fā)性肌炎的干預(yù)作用.pdf

1、背景:多發(fā)性肌炎(polymyositis，PM)是一種細(xì)胞免疫介導(dǎo)的自身免疫性疾病，可引起患者肌肉疼痛和無(wú)力，甚至威脅患者的生命，但迄今為止其病因和發(fā)病機(jī)制仍不清楚。國(guó)外有研究證實(shí)，PM患者肌組織中溶酶體酶B(Cathepsin B，CB)表達(dá)高于正常，但其沒(méi)有進(jìn)一步研究CB在PM發(fā)病中的作用;國(guó)內(nèi)除本課題組對(duì)其進(jìn)行過(guò)初步研究外，尚無(wú)關(guān)于CB在PM發(fā)病中作用的研究。
　　目的:觀(guān)察PM患者肌組織CB的表達(dá)及作用;并通過(guò)給豚鼠注射

2、柯薩奇病毒B1建立PM的動(dòng)物模型，觀(guān)察豚鼠PM模型肌組織中CB的表達(dá)及作用;并給予CB抑制劑CA-074Me干預(yù)，觀(guān)察CA-074Me在CVB1誘導(dǎo)的豚鼠PM模型中是否有保護(hù)作用:進(jìn)一步探討CB在PM中的作用機(jī)理，為PM的特異性治療尋找潛在的靶點(diǎn)。
　　方法:(1)留取20例PM患者和5例健康成人肌肉組織，采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)、免疫組織化學(xué)、Western blot和病理學(xué)方法檢測(cè)PM患者和健康成人肌肉組織細(xì)胞

3、凋亡、CB的表達(dá)、CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)情況，觀(guān)察CB與PM患者肌組織炎癥、細(xì)胞凋亡的關(guān)系，并進(jìn)一步確定CB與PM發(fā)病之間的關(guān)系。(2)32只健康雌性（4周齡）短毛英國(guó)種豚鼠，體重154g±18g，隨機(jī)分成4組，每組8只，除健康對(duì)照組豚鼠腹腔注射生理鹽水(NS)外，其他豚鼠均給予腹腔注射CVB1、兔肌勻漿和完全弗氏佐劑建立PM模型，之后，分別給予CA-074Me組和NS組豚鼠腹腔注射CB特異性抑制劑CA-074Me和NS;相同時(shí)間點(diǎn)處死動(dòng)物

4、，取各組豚鼠股部肌肉組織進(jìn)行病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測(cè)，觀(guān)察肌組織炎癥、CD8+T細(xì)胞及CB陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，并采用TUNEL法檢測(cè)肌組織細(xì)胞凋亡情況，采用Western blot及實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)法檢測(cè)CB和凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bax)表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)相對(duì)于健康成人，PM患者肌組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加，炎癥評(píng)分和細(xì)胞凋亡率明顯升高，而且，免疫組織化學(xué)和Western blot方法檢測(cè)結(jié)果均示CB

5、蛋白表達(dá)亦明顯升高。(2)與PM患者觀(guān)察結(jié)果一致，PM模型組豚鼠肌組織CB表達(dá)、炎癥評(píng)分及細(xì)胞凋亡率明顯高于健康對(duì)照組。在CA-074Me組，CA-074Me降低了CB表達(dá)，同時(shí)也減輕了CVB1導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。CA-074Me對(duì)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用是通過(guò)減少Bax的表達(dá)，進(jìn)而使Bcl-2/Bax比值升高而發(fā)揮作用的。然而，CA-074Me對(duì)CVB1誘導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞浸潤(rùn)無(wú)影響。
　　結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)證實(shí)PM患者肌組織炎癥