CO-,2-氣腹對胃癌細(xì)胞粘附與侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響.pdf

1、目的：探討不同壓強(qiáng)、不同時(shí)程CO2氣腹環(huán)境對胃癌細(xì)胞粘附與侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響。 方法：建立體外CO2氣腹模型，選用三種不同分化程度的胃癌細(xì)胞株MKN-45(低分化腺癌細(xì)胞)、SGC-7901(中分化腺癌細(xì)胞)和MKN-28(高分化腺癌細(xì)胞)，分別在不同壓強(qiáng)9mmHg、15mmHg以及常規(guī)條件下(0mmHg，對照組)作用2h和4h后，用RT-PCR法檢測粘附侵襲分子E-鈣粘蛋白、細(xì)胞間粘附分子(ICAM-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MM

2、P-2)和血管內(nèi)皮生長因子(VEGF-A)的表達(dá)；流式細(xì)胞儀檢測不同分化程度的胃癌細(xì)胞株表達(dá)E-cadherin和ICAM-1的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)并用CytoMatrixTM細(xì)胞粘附試劑盒和QCMTM細(xì)胞侵襲試劑盒檢測經(jīng)過不同壓強(qiáng)和時(shí)程CO2作用后三種胃癌細(xì)胞株的粘附侵襲能力。此外，將不同壓強(qiáng)(9mmHg和15mmHg)和不同時(shí)程(2h和4h)CO2氣腹作用后的胃癌細(xì)胞以及對照組(0mmHg)胃癌細(xì)胞分別注入裸鼠腹腔(2×106個細(xì)胞/只)，共

3、計(jì)5組，每組10只。4周后每組取5只處死，記錄裸鼠腹腔成瘤情況、腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移情況并觀察其余裸鼠的生存時(shí)間。 結(jié)果：①RT-PCR顯示三種不同分化胃癌細(xì)胞株經(jīng)CO2處理后，隨著時(shí)程由2h延長至4h以及壓強(qiáng)由9mmHg升高至15mmHg，E-cadherin Mrna的表達(dá)有下降的趨勢，MKN-45的灰度比值由2.260下降至2.190，SGC-7901和MKN-28的灰度比值也分別由2.160、2.060下降至2.090、1.990

4、，而ICAM-1、MMP-2和VEGF-A Mrna的表達(dá)則有上升的趨勢。ICAM-1表現(xiàn)為MKN-45的灰度比值由2.200升高至2.279，SGC-7901和MKN-28的灰度比值分別由2.100、2.002升高至2.179、2.079；MMP-2表現(xiàn)為MKN-45的灰度比值由2.050升高至2.130，SGC-7901和MKN-28的灰度比值分別由1.950、1.850升高至2.033、1.930；VEGF-A表現(xiàn)為MKN-45的

5、灰度比值由2.100升高至2.160，SGC-7901和MKN-28的灰度比值分別由2.000、1.900升高至2.060、1.960，但是各實(shí)驗(yàn)組間比較抑或?qū)嶒?yàn)組與對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。②流式細(xì)胞結(jié)果顯示表達(dá)E-cadherin的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)有下降的趨勢，MKN-45的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由對照組9.57％下降至15mmHg(4h)組9.26％；SGC-7901的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由對照組9.02％下降至15mmHg(4h)組8

6、.96％；MKN-28的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由對照組8.95％下降至15mmHg(4h)組8.49％。而表達(dá)ICAM-1的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)則有升高的趨勢，MKN-45的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由對照組39.87％升高至15mmHg(4h)組40.29％；SGC-7901的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由對照組30.52％升高至15mmHg(4h)組30.59％；MKN-28的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)由對照組22.17％升高至15mmHg(4h)組22.59％，但是實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

7、義(P>0.05)。③粘附侵襲試劑盒實(shí)驗(yàn)也得出類似的結(jié)果，MKN-45的粘附能力(cd/m2)由1.75±0.09下降至1.69±0.12；SGC-7901的粘附能力(cd/m2)由1.44±0.08下降至1.39±0.10；MKN-28的粘附能力(cd/m2)由1.71±0.07下降至1.66±0.08，MKN-45的侵襲能力(cd/m2)由1.75±0.06升高至1.80±0.11；SGC-7901的侵襲能力(cd/m2)由1.54

8、±0.06升高至1.58±0.06；MKN-28的侵襲能力(cd/m2)由1.81±0.07升高至1.86±0.04。④裸鼠模型顯示三種胃癌細(xì)胞株在不同CO2氣腹環(huán)境及對照條件下，腹腔轉(zhuǎn)移成瘤個數(shù)隨著時(shí)程的延長及壓強(qiáng)的升高而增加，MKN-45的腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移個數(shù)由31.68±3.12升高至33.06±4.01；SGC-7901的腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移個數(shù)由30.78±4.27升高至32.11±3.56；MKN-28的腹腔內(nèi)轉(zhuǎn)移個數(shù)由29.77±2.52

9、升高至31.03±3.12；而裸鼠的存活天數(shù)則減少，MKN-45的生存天數(shù)由22.68±4.32下降至21.46±3.32；SGC-7901的生存天數(shù)由22.27±3.47下降至21.39±2.67；MKN-28的生存天數(shù)由23.07±3.71下降至21.97±2.74，但對照組和實(shí)驗(yàn)組腹腔成瘤個數(shù)與存活時(shí)間的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：在壓強(qiáng)不高于15mmHg以及時(shí)程不超過4h情況下，不同壓強(qiáng)與時(shí)程CO2對三種