新型骨修復材料的制備與體外研究.pdf

1、目的:
　　本研究以PGA和β-TCP為基料制備復合支架材料，并觀察復合支架材料的微觀結(jié)構(gòu)，測試其孔隙率、抗壓強度。將富血小板血漿(Platelet-Rich-Plasma，簡稱PRP)作為內(nèi)源性生長因子與制備出的復合支架材料復合研究其對成骨細胞的增殖、分化作用。為動物實驗及臨床應用提供實驗依據(jù)。
　　方法:
　　1.改良溶液澆鑄-離子瀝濾法制備質(zhì)量比1:1(A組)與1:3(B組)的PGA/β-TCP復合支架材料，掃描

2、電鏡(SEM)觀察兩組支架材料的微結(jié)構(gòu)，用萬能材料試驗機對制備的試樣進行抗壓縮強度的測試，用液體置換法測試PGA/β-TCP復合支架材料的孔隙率。
　　2.成骨細胞的原代培養(yǎng)：無菌條件下處死一日齡SD大鼠，超凈臺下剝離出顱骨片，Ⅰ型膠原酶消化成單個細胞后以10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)、純化。傳至第三代，用倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)，堿性磷酸酶染色法、茜素紅鈣結(jié)節(jié)染色法鑒定成骨細胞。
　　3.取SD大鼠全血，兩步離心法制備P

3、RP，將上步培養(yǎng)的三代成骨細胞接種于制備好的PGA/β-TCP復合支架材料上并與PRP復合。實驗A組為成骨細胞復合5％PRP/PGA/β-TCP支架，B組為成骨細胞復合10％PRP/PGA/β-TCP支架。對照組為成骨細胞復合不加PRP的PGA/β-TCP材料。于培養(yǎng)的1d、2d、3d時做細胞增殖MTT檢測，2d、4d、6d做堿性磷酸酶定量檢測。
　　結(jié)果:
　　1.SEM照片可見兩組支架材料均為三維多孔結(jié)構(gòu)，孔隙的連通性好

4、。β-TCP均勻地分散于聚合物中，B組支架材料中β-TCP顆粒明顯多于A組。B組支架材料的抗壓縮強度大于A組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；A、B組支架材料孔隙率均大于85％，A組孔隙率大于B組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。
　　2.倒置顯微鏡下可見48h后細胞貼壁生長良好，細胞體積較大，呈三角形、多角形或不規(guī)則形。胞漿豐富并向外伸展，有突起。7d后細胞長滿培養(yǎng)瓶，細胞間出現(xiàn)融合，細胞邊界不清。第三代細胞堿性磷酸酶染色可

5、見多數(shù)細胞細胞核、胞質(zhì)內(nèi)染色呈陽性。鈣結(jié)節(jié)茜素紅染色可見細胞之間有團塊狀的鈣鹽沉積，呈橘紅色或深紅色。礦化結(jié)節(jié)大小不一，有的多個礦化結(jié)節(jié)可以融合。
　　3.實驗A、B組與對照組的細胞增殖隨時間的延長而增加，實驗A、B組較對照組各相同時點細胞增殖明顯上升，同一時間點，實驗B組測得的OD值最高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；3組在2d時檢測出堿性磷酸酶的活性均較低，
　　4、6d時三組成骨細胞ALP的活性隨時間的延長呈增加趨

6、勢，實驗B組成骨細胞ALP的活性隨時間變化最為明顯，其6d時成骨細胞ALP含量顯著高于2d時的ALP含量。對照組各相同時點ALP的活性雖也有升高，但都低于實驗兩組。差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.A、B組PGA/β-TCP復合支架材料孔隙率均在85％以上，B組復合支架抗壓縮強度顯著高于A組，B組(1:3質(zhì)量比)PGA/β-TCP復合支架更能適應臨床對支架材料的要求。
　　2.PRP可以促進PGA