二甲雙胍對(duì)前列腺癌的抑制效應(yīng).pdf

1、目的:通過研究IL-6對(duì)前列腺癌細(xì)胞增殖、遷移和生存力的影響，探索IL-6在前列腺癌進(jìn)展中的作用機(jī)制;同時(shí)研究二甲雙胍對(duì)IL-6過表達(dá)的前列腺癌細(xì)胞株增殖、遷移和細(xì)胞周期的影響，探索二甲雙胍抑制前列腺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子機(jī)制。
　　方法:(1)運(yùn)用慢病毒載體轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建IL-6過表達(dá)的前列腺癌LNCaP細(xì)胞株，利用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞綠色熒光的表達(dá)以明確慢病毒轉(zhuǎn)染情況，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化;運(yùn)用ELISA檢測(cè)IL-

2、6表達(dá)水平;運(yùn)用MTT技術(shù)比較IL-6過表達(dá)LNCaP細(xì)胞（LNCaP-IL-6）與空病毒載體轉(zhuǎn)染的LNCaP細(xì)胞(LNCaP-ctr)在比卡魯胺處理不同時(shí)間段的生存率;運(yùn)用western blot技術(shù)比較IL-6過表達(dá)的LNCaP細(xì)胞和正常LNCaP細(xì)胞Twist和E-cadherin蛋白表達(dá);運(yùn)用RT-PCR技術(shù)比較上述蛋白的基因轉(zhuǎn)錄水平。(2)加入不同濃度的二甲雙胍刺激，運(yùn)用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的二甲雙胍對(duì)正常LNCaP和IL-

3、6過表達(dá)的LNCaP細(xì)胞生存率的影響，并選取最佳工作濃度;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期;將LNCaP-IL-6細(xì)胞分為二甲雙胍處理組與非處理組，運(yùn)用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞遷移，Western blot技術(shù)檢測(cè)Twist和E-cadherin蛋白表達(dá)水平，RT-PCR技術(shù)檢測(cè)上述蛋白基因轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果:(1) LNCaP-IL-6和LNCaP-ctr細(xì)胞在激光共聚焦顯微鏡下均呈現(xiàn)出明顯的綠色熒光;在倒置顯微鏡下觀察顯示LNCaP-IL-

4、6細(xì)胞形態(tài)呈紡錘形和星狀轉(zhuǎn)變，細(xì)胞排列散亂，連接減少，而LNCaP-ctr細(xì)胞排列緊密，呈鵝卵石狀，與正常LNCaP形態(tài)無明顯差別;LNCaP-IL-6細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6表達(dá)水平達(dá)到5802±128.09 pg/mL，而LNCaP-ctr細(xì)胞和正常LNCaP分泌量分別為1.14±0.19 pg/mL和1.98±0.84pg/mL; MTT檢測(cè)結(jié)果顯示出LNCaP-IL-6細(xì)胞的增殖速度及生存力明顯優(yōu)于LNCaP-ctr細(xì)胞，P＜0.0

5、5; LNCaP-IL-6細(xì)胞中Twist mRNA和蛋白表達(dá)水平均高于LNCaP-ctr，而E-cadherin mRNA和蛋白表達(dá)水平均低于LNCaP-ctr細(xì)胞。(2)二甲雙胍對(duì)LNCaP-IL-6細(xì)胞的抑制作用小于對(duì)LNCaP-ctr細(xì)胞的抑制作用，兩者生存率相比P＜0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;根據(jù)MTT結(jié)果，選取2mM的二甲雙胍為最適作用濃度;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示二甲雙胍阻滯LNCaP-ctr和LNCaP-IL-6細(xì)胞周期

6、的S期;加入2mM二甲雙胍處理的LNCaP-IL-6細(xì)胞的遷移明顯受到抑制。二甲雙胍處理組的LNCaP-IL-6細(xì)胞Twist表達(dá)水平明顯低于非處理組，而E-cadherin表達(dá)水平較非處理組則明顯升高;加入2mM二甲雙胍處理后，比較兩組細(xì)胞中Twist和E-cadherin mRNA的含量，二甲雙胍處理組Twist mRNA相對(duì)含量較非處理組顯著下降，而E-cadherin mRNA水平較非處理組明顯升高。
　　結(jié)論:(1) I