南美響尾蛇神經(jīng)毒素對人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞生長抑制作用研究.pdf

1、第一部分南美響尾蛇神經(jīng)毒素對人肺鱗癌SK—MES-1細(xì)胞體外生長抑制作用及其相關(guān)機(jī)制
　　 目的:觀察南美響尾蛇神經(jīng)毒素(Crotoxin,CrTX)體外抗腫瘤作用,并初步探討其相關(guān)作用機(jī)制。
　　 方法:以人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象,通過四氮唑鹽還原法(MTT)、細(xì)胞集落平板克隆實(shí)驗(yàn)觀察CrTX、吉非替尼(Iressa)及兩藥聯(lián)合應(yīng)用對SK-MES-1細(xì)胞的生長抑制作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CrTX對SK-M

2、ES-1細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期的影響；細(xì)胞間接免疫熒光染色法檢測p-JNK蛋白表達(dá)情況；蛋白免疫印跡法(Western blot)測定CrTX作用后SK-MES-1細(xì)胞內(nèi)p-JNK、BCL-2及Caspase-3活性亞單位P17蛋白表達(dá)水平,并以SP600125抑制JNK活性后觀察CrTX對人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞的影響。
　　 結(jié)果:CrTX對人肺鱗癌SK—MES-1細(xì)胞有生長抑制作用,與Iressa聯(lián)用可增強(qiáng)Iressa抗

3、腫瘤效果；CrTX對SK-MES-1細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡和G1期阻滯作用,并可引起人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞p-JNK、Caspase-3活性亞單位P17蛋白表達(dá)上調(diào)及抑凋亡基因BCL-2下調(diào)；而用SP600125抑制JNK活性后,CrTX對人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用基本消失,p-JNK、Caspase-3活性亞單位P17及抑凋亡基因BCL-2蛋白表達(dá)水平無明顯變化。
　　 結(jié)論:CrTX對人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞

4、體外生長有抑制作用,其作用與誘導(dǎo)凋亡和G1期阻滯有關(guān),其中誘導(dǎo)凋亡作用系激活JNK信號通路、磷酸化BCL-2,進(jìn)而活化Caspase-3所致。
　　 第二部分南美響尾蛇神經(jīng)毒素對人肺鱗癌SK—MES-1細(xì)胞裸鼠移植瘤生長抑制作用研究
　　 目的:觀察南美響尾蛇神經(jīng)毒素(Crotoxin,CrTX)對人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞裸鼠移植瘤生長抑制作用及其對移植瘤組織微血管生成的影響。
　　 方法:裸鼠皮下接種人肺鱗

5、癌SK-MES-1細(xì)胞建立裸鼠移植瘤模型,分對照組,CrTX(10ug／kg生理鹽水稀釋后腹腔注射2次／周)組,吉非替尼(Iressa)(100mg／kg／day)組,聯(lián)合用藥組(CrTX+Iressa)；給藥四周后比較移植瘤瘤重,計(jì)算抑瘤率；并用免疫組化法測定移植瘤微血管密度(microvessd density,MVD)及透射電鏡觀察移植瘤微血管內(nèi)皮超微結(jié)構(gòu)改變。
　　 結(jié)果:CrTX,Iressa均對人肺鱗癌SK-MES-

6、1細(xì)胞移植瘤生長有抑制作用,二者聯(lián)合應(yīng)用可顯著提高抑瘤作用,其抑瘤率分別是21.36％、22.88％及35.92％,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；免疫組化MVD計(jì)數(shù)示CrTX組、Iressa組及聯(lián)合用藥組均較對照組明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)；電鏡觀察示:CrTX組、Iressa組及聯(lián)合用藥組移植瘤微血管數(shù)量較對照組明顯減少,微血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同程度損害,其中聯(lián)合用藥組最為明顯。
　　 結(jié)論:CrTX對