蛋白A—藻藍蛋白β亞基雙功能蛋白的性質(zhì)及其在免疫檢測中的應(yīng)用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、免疫測定技術(shù)的應(yīng)用遍及醫(yī)學(xué)檢驗、環(huán)境監(jiān)測、食品檢驗等諸多領(lǐng)域，尤其是其分支之一標記免疫測定技術(shù)自1959年創(chuàng)立以來迅速發(fā)展。對于能使測定過程更簡單、快速新型免疫標記物的開發(fā)一直是研究的熱點，標記物的靈敏度、特異性和安全性決定了其實用價值。本研究中所利用的藻藍蛋白的特殊物理及光學(xué)性質(zhì)就使之十分適合作為熒光免疫的標記物。
　　 在本研究中，將金黃色葡萄球菌的總DNA作為模板，通過聚合酶鏈式反應(yīng)擴增出目的片段即金黃色葡萄球菌蛋白A基因

2、（spa），并通過酶切位點的轉(zhuǎn)換成功構(gòu)建表達載體pET-spa。其后，利用實驗室已經(jīng)成功構(gòu)建并保存的質(zhì)粒pET-cpcB，構(gòu)建能表達融合蛋白SPA-CpcB融合質(zhì)粒pET-spa-cpcB。
　　 將構(gòu)建的SPA-CpcB融合基因與兩種藻膽色素（藻藍色素和藻紅色素）分別和藻膽蛋白裂合酶CpeS進行體內(nèi)共表達，并檢測表達產(chǎn)物的熒光活性。將SPA-CpcB與生物素標記的兔抗體進行熒光免疫反應(yīng)并通過多功能微孔板熒光檢測儀檢測。結(jié)果表明

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