胰島素對Aβ25-35損傷的神經元的保護作用.pdf

1、背景和目的:
　　進入21世紀以來，我國老齡化社會的步伐進一步加快，伴隨而來的老年慢性疾病——阿爾茨海默病的發(fā)病率日益上升，成為繼心腦血管疾病之后又一嚴重危害老年人身心健康的常見疾病，引起了社會的廣泛關注。阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）是一種較為常見的進行性中樞神經系統(tǒng)退行性疾病，常見臨床表現為記憶力進行性下降、認知功能障礙以及人格改變和情感障礙等?；颊甙l(fā)病初期以近記憶力下降為突出表現，后期可完全喪失

2、社交能力和自理能力，甚至可能并發(fā)呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)等其他全身系統(tǒng)疾病的癥狀，給家庭、國家和社會帶來了沉重的經濟負擔和心理負擔。
　　阿爾茨海默病患者的認知功能衰退是不可逆的，而其發(fā)病機制尚不明確，學說眾多，影響最廣泛的是β淀粉樣蛋白學說。AD的治療目前尚無特異性療法，只能給予對癥治療延緩病程的發(fā)展。近些年來的流行病學資料提示糖尿病與AD的發(fā)病存在著某種聯系:糖尿病患者患AD風險較非糖尿病患者明顯升高[1]。隨著糖年病學家和神經學家

3、對二者發(fā)病機制的探索發(fā)現:AD患者存在著中樞性胰島素抵抗[1]。因此胰島素信號通路與AD發(fā)病的關系也成為學者們研究的熱點。
　　神經元是神經系統(tǒng)的結構和功能基本單位之一，由細胞體和細胞突起兩部分組成。依據形態(tài)、結構和功能的不同，細胞突起又可分為樹突和軸突。樹突表面的許多棘狀突起被稱為樹突棘，是形成突觸的部位，也是神經元接收信號的部位，與學習記憶的形成和神經系統(tǒng)疾病密切相關[2]。樹突的分支和樹突棘可擴大神經元接受神經沖動的表面積。

4、因此神經元及其樹突分支對中樞神經系統(tǒng)正常行使其功能起著至關重要的作用。本實驗擬用Aβ25-35終濃度為20μmol·L-1的培養(yǎng)液孵育海馬神經元24h制作AD細胞模型，用含有胰島素的培養(yǎng)液干預，觀察胰島素對Aβ損傷的神經元及其樹突分支的保護作用。
　　材料與方法:
　　將體外原代培養(yǎng)7天的大鼠海馬神經元隨機分為空白對照組、模型組、不同濃度胰島素預處理組?？瞻讓φ战M用Neurobasal培養(yǎng)液培養(yǎng);模型組加入終濃度為20μmo

5、l·L-1的Aβ25-35孵育24h建立AD細胞模型;不同濃度胰島素預處理組在加入Aβ25-35之前用胰島素濃度終濃度分別為0.1MU·L-1、0.5MU·L-1、1MU·L-1、2MU·L-1的Neurobasal培養(yǎng)液預孵育4h。各組細胞在進行上述處理之后，通過MTS法測試各組細胞活力并統(tǒng)計存活率，用MDA試劑盒和SOD試劑盒測試MDA含量、SOD活性，通過腺病毒轉染神經元觀察細胞樹突總長度(TDBL)及一級樹突數目(PDN)。

6、r>　　結果:
　　1.MTS法檢測細胞活力及細胞存活率:與空白對照組相比，Aβ組細胞活力明顯下降，存活率下降;與Aβ組相比，Aβ+胰島素(0.1，0.5，1MU·L-1)組細胞活力上升，存活率上升至，而Aβ+胰島素(2MU/L)組細胞活力下降。細胞存活率下降，甚至低于Aβ組(P＜0.05)。
　　2.MDA含量、SOD活性測定:與空白對照組相比，Aβ組細胞SOD明顯下降，MDA含量明顯增加;與Aβ組相比，Aβ+胰島素(0.

7、1，0.5，1MU·L-1)組SOD上升、MDA下降，Aβ+胰島素(2MU/L)組SOD下降、MDA含量上升(P＜0.05)。
　　3.神經元樹突觀察:Aβ組TDBL和PDN較空白對照組明顯減少(P＜0.05);Aβ+胰島素(0.1，0.5，1MU·L-1)組TDBL、PDN較Aβ組均增加(P＜0.05);而Aβ+胰島素(2MU/L)組TDBL反而較Aβ組減少(P＜0.05)，PDN較Aβ組減少(P＞0.05)。
　　結論: