酸橙果實(shí)不同采收期化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化及枳實(shí)、枳殼藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究.pdf

1、酸橙主要分布于四川、重慶、湖南、江西等地，源于酸橙不同采收期的藥材有枳實(shí)和枳殼，枳實(shí)5～6月采收，枳殼7月果皮尚綠時(shí)采收?！按ㄨ讓?shí)、川枳殼”品質(zhì)佳，行銷全國(guó)各地，是四川的道地藥材之一。“湘枳實(shí)、湘枳殼”發(fā)展很快，產(chǎn)量大，是全國(guó)商品生產(chǎn)基地。江西枳實(shí)、枳殼以清江縣黃崗和新干縣三湖洲的最著名，為傳統(tǒng)道地藥材。枳實(shí)、枳殼來(lái)源相同，而不同的采收期又使兩藥在作用部位、作用強(qiáng)度等方面各有特性。如同為理氣藥，中醫(yī)認(rèn)為枳實(shí)專利低位性氣滯，而枳殼專利高位

2、性氣滯;枳實(shí)力猛，枳殼力緩。現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)對(duì)枳實(shí)以辛弗林為質(zhì)控指標(biāo)，對(duì)枳殼以柚皮苷和新橙皮苷為質(zhì)控指標(biāo)，并未體現(xiàn)二者在功效上的共性與特性。
　　由于質(zhì)量評(píng)價(jià)體系不完善，有關(guān)酸橙果實(shí)不同采收期成分系統(tǒng)分析比較研究未見相關(guān)報(bào)道。本研究對(duì)酸橙果實(shí)（5月至9月，每半月采摘一次）首次進(jìn)行了從植株掛果到果實(shí)成熟的整個(gè)生長(zhǎng)期的研究，并以主要活性成分黃酮類、生物堿類、酚酸類、檸檬苦素等為指標(biāo)，系統(tǒng)研究酸橙果實(shí)整個(gè)生長(zhǎng)期內(nèi)化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為酸橙

3、枳實(shí)、枳殼采收期的制定及質(zhì)量評(píng)價(jià)體系的完善提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.酸橙果實(shí)不同采收期化學(xué)成分比較研究
　　對(duì)酸橙果實(shí)不同采收期黃酮類成分、生物堿、總酚酸、檸檬苦素的含量變化進(jìn)行了對(duì)比分析，以期為酸橙枳實(shí)、枳殼藥材采收期的制定提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　1.1黃酮類成分
　　枳實(shí)及枳殼藥材中所含黃酮類成分主要以蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷等為主，本研究采用HPLC法和UV法分別測(cè)定上述4種黃酮苷

4、及總黃酮含量。結(jié)果表明:隨著酸橙果實(shí)成熟度的增加，總黃酮含量從41.13％降至8.28％，其中橙皮菅和新橙皮苷的含量呈現(xiàn)遞減的變化趨勢(shì)，而蕓香柚皮苷和柚皮苷的含量呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢(shì)。黃酮類成分間存在何種轉(zhuǎn)化關(guān)系有待進(jìn)一步研究。
　　1.2生物堿類成分
　　采用HPLC法和UV法分別測(cè)定藥材中辛弗林和總生物堿的含量。結(jié)果表明:隨著酸橙果實(shí)成熟度的增加，總生物堿和辛弗林的含量均呈現(xiàn)遞減的變化趨勢(shì)，其中總生物堿含量從10.

5、35％降至1.2％，辛弗林含量從0.79％降至0.22％。
　　1.3總酚酸
　　文獻(xiàn)報(bào)道，酚酸類成分不僅具有抗氧化、抗自由基、抑制低密度脂蛋白的氧化以及預(yù)防心血管疾病的作用，而且還具有抗癌、抗炎癥和抗血小板凝聚等功能。目前，枳實(shí)、枳殼中酚酸類成分研究較少，本研究首次比較分析了酸橙果實(shí)不同采收期藥材中總酚酸含量變化規(guī)律。隨著酸橙果實(shí)成熟度的增加，總酚酸的含量從8.73％遞減至0.55％，研究結(jié)果為酸橙果實(shí)中酚酸類提取物原藥材

6、選擇提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　1.4檸檬苦素
　　檸檬苦素作為苦味物質(zhì)，在柑橘屬果皮中普遍存在。文獻(xiàn)報(bào)道具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗癌等廣泛的藥理活性，本研究采用HPLC法，首次比較分析了酸橙果實(shí)不同采收期藥材中檸檬苦素含量變化規(guī)律。隨著酸橙果實(shí)成熟度的增加，檸檬苦素含量在6月中旬最高(0.5％)，隨后呈現(xiàn)先下降后升高再下降的變化，9月初的藥材中含量最低(0.26％)，研究結(jié)果為酸橙果實(shí)中檸檬苦素提取物原藥材選擇提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　

7、　以上結(jié)果表明，隨著酸橙果實(shí)成熟度的增加，總黃酮、總生物堿、總酚酸、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林的含量均呈現(xiàn)遞減的變化趨勢(shì);柚皮苷、蕓香柚皮苷的含量呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢(shì);檸檬苦素的含量呈現(xiàn)先升高，隨后下降再升高再下降的波動(dòng)變化。研究結(jié)果為酸橙枳實(shí)、枳殼采收期的制定提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　2.枳殼藥材不同部位化學(xué)成分比較研究
　　雷敩最先提出枳殼用時(shí)先去瓤，明代陳嘉謨認(rèn)為“去瓤免脹”。且核瓤極易發(fā)霉、蟲蛀、變質(zhì)，炮制過(guò)程中篩去

8、核瓤。既往文獻(xiàn)報(bào)道中，尚無(wú)關(guān)于枳殼果皮、核瓤不同部位有效成分含量比較研究。本研究比較分析了枳殼果皮、核瓤中黃酮類和生物堿類成分含量。結(jié)果，枳殼果皮與核瓤中均存在蕓香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林等有效成分，且果皮中的含量高于核瓤。枳殼核瓤中尚存在多種有效成分，對(duì)加工炮制過(guò)程中產(chǎn)生的核瓤可再利用，本研究為枳殼藥材資源的綜合利用提供了依據(jù)。
　　3.枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油成分比較研究
　　3.1揮發(fā)油提取方法研究
　　

9、揮發(fā)油作為二者主要藥效成分之一，目前對(duì)枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油的提取方法多數(shù)為傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法，而對(duì)其它方法如溶劑回流法、超聲提取法等研究較少。本研究采用GC-MS技術(shù)分別對(duì)揮發(fā)油成分、石油醚超聲提取物、乙醚超聲提取物、正己烷超聲提取物、石油醚索式回流提取物、乙醚索式回流提取物、正己烷索式回流提取物、水蒸氣蒸餾法提取物、藥典附錄XD甲法提取物進(jìn)行分析鑒定，首次比較分析了不同提取方法對(duì)揮發(fā)油成分的影響。結(jié)果，溶劑法提取的揮發(fā)油中大分子化合物居多

10、，水蒸汽蒸餾法和藥典甲法提取的揮發(fā)油以小分子化合物居多。其中以藥典甲法提取的揮發(fā)油成分GC-MS總離子流圖不僅峰的個(gè)數(shù)多，而且經(jīng)鑒定的成分也較多，其次是水蒸汽蒸餾法。表明，不同提取方法影響揮發(fā)油的成分組成和各成分的相對(duì)含量，提示枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油的研究應(yīng)綜合考慮多種提取方法。
　　3.2不同產(chǎn)地枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油成分比較研究
　　采用藥典附錄XD甲法提取枳實(shí)、枳殼中的揮發(fā)油，運(yùn)用GC-MS法對(duì)枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油成分進(jìn)行分析。結(jié)果，

11、檸檬烯和芳樟醇是枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油中的主要成分。不同產(chǎn)地枳實(shí)中檸檬烯相對(duì)含量在22.99％～28.19％之間，芳樟醇相對(duì)含量在13.26％～18.86％之間，a-松油醇相對(duì)含量在1.81％～2.55％之間，香芹酚相對(duì)含量在0.18％～0.89％之間，香葉醇相對(duì)含量在0.15％～0.41％之間;不同產(chǎn)地枳殼中檸檬烯相對(duì)含量在9.44％～47.81％之間，芳樟醇相對(duì)含量在10.24％～11.90％之間，a-松油醇相對(duì)含量在3.15％～3.72

12、％之間，香芹酚相對(duì)含量在0.09％～0.28％之間，香葉醇的相對(duì)含量在0.46％～0.88％之間。研究首次發(fā)現(xiàn)芳樟醇和香芹酚的含量隨著果實(shí)成熟度的增加而降低，而a-松油醇和香葉醇的含量隨著果實(shí)成熟度的增加而升高。
　　3.3枳實(shí)、枳殼麩炒前后揮發(fā)油成分比較研究
　　比較江枳實(shí)和江枳殼麩炒前后揮發(fā)油成分差異發(fā)現(xiàn)，麩炒后檸檬烯的含量升高，與文獻(xiàn)報(bào)道相符。且麩炒后，成分種類和成分間的比例也發(fā)生了變化。炮制前后揮發(fā)油GC-MS圖譜顯

13、示，在相同的保留時(shí)間處有峰的升高或降低以及出現(xiàn)新的峰或峰消失的現(xiàn)象。江枳實(shí)經(jīng)麩炒后，芳樟醇/檸檬烯的比值從麩炒前的0.57降至0.29;江枳殼經(jīng)麩炒后，芳樟醇/檸檬烯的比值從麩炒前的1.06降至0.25。結(jié)果表明，炮制后枳實(shí)、枳殼揮發(fā)油不僅化學(xué)成分含量發(fā)生變化，而且揮發(fā)油主要成分芳樟醇和檸檬烯的比例也發(fā)生較大變化，研究結(jié)果為進(jìn)一步揭示枳實(shí)、枳殼藥材炮制機(jī)理提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　4.首次對(duì)總酚酸提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化
　　目前，對(duì)

14、枳實(shí)、枳殼中功效成分提取方法研究主要集中在黃酮類化合物、辛弗林、揮發(fā)油等方面，對(duì)抗氧化成分酚酸類提取工藝研究較少。本課題采用超聲波技術(shù)，運(yùn)用響應(yīng)面分析法(Response Surface Method，RSM)對(duì)總酚酸提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，以沒(méi)食子酸為對(duì)照，采用比色法測(cè)定，確定提取總酚酸的最優(yōu)工藝為:56％乙醇、液料比28∶1、溫度30℃、超聲功率為400W，提取2次，每次20min。
　　本研究為枳實(shí)、枳殼中酚酸類成分的開發(fā)利用奠定

15、了基礎(chǔ)。
　　5.枳實(shí)、枳殼藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究
　　目前，化學(xué)評(píng)價(jià)法在藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中應(yīng)用廣泛，但評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇尚有局限。如本課題研究的枳實(shí)、枳殼藥材，現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)以不同的成分為指標(biāo)，對(duì)同來(lái)源藥材采收期的制定及質(zhì)量評(píng)價(jià)存在局限。
　　本研究首次以酸橙掛果到果實(shí)成熟的整個(gè)生長(zhǎng)期為切入點(diǎn)，以多指標(biāo)成分跟蹤整個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，發(fā)現(xiàn):隨著酸橙果實(shí)成熟度增加，總黃酮、總生物堿、總酚酸、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林的含量均

16、呈現(xiàn)遞減的變化趨勢(shì);柚皮苷、蕓香柚皮菅的含量呈現(xiàn)先增加后降低的變化趨勢(shì);檸檬苦素的含量呈現(xiàn)先升高，隨后下降再升高再下降的波動(dòng)變化。因此，參考現(xiàn)行藥典評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)同來(lái)源枳實(shí)、枳殼藥材采收期的研究及質(zhì)量評(píng)價(jià)以相同的成分為指標(biāo)，分別研究制定枳實(shí)、枳殼藥材中所含柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林的含量限度，更能全面體現(xiàn)同屬同類藥材的共性和個(gè)性。
　　由于揮發(fā)油成分組成的不穩(wěn)定性，且揮發(fā)油總量隨著酸橙果實(shí)成熟度的增加而減少;芳樟醇和香芹酚的含量隨著果

17、實(shí)成熟度的增加而降低，a-松油醇和香葉醇的含量隨著果實(shí)成熟度的增加而升高。因此，對(duì)枳實(shí)、枳殼藥材揮發(fā)油的質(zhì)量評(píng)價(jià)應(yīng)著眼于揮發(fā)油總量及揮發(fā)油成分中芳樟醇、香芹酚、a-松油醇、香葉醇的含量。
　　本研究對(duì)來(lái)源相近，功效相似，卻又存在差異的同來(lái)源藥材采收期制定及質(zhì)量評(píng)價(jià)具有示范意義。由于時(shí)間及課題經(jīng)費(fèi)的關(guān)系，僅對(duì)重慶榮昌地區(qū)的枳實(shí)、枳殼藥材進(jìn)行了采收期研究，枳實(shí)、枳殼主產(chǎn)區(qū)及道地產(chǎn)區(qū)不同采收期藥材化學(xué)成分動(dòng)態(tài)變化規(guī)律有待進(jìn)一步研究，在此