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文檔簡介
1、目的:
1.利用C57BL/6小鼠建立橋本氏甲狀腺炎(hashimoto'sthyroiditis,HT)的小鼠模型-實驗性自身免疫性甲狀腺炎(experimentalautoimmunethyroiditis,EAT),使其具有甲狀腺自身抗體水平升高、甲狀腺組織淋巴細胞浸潤的特征。
2.分離培養(yǎng)健康C57BL/6小鼠骨鏈間充質(zhì)干細胞(bonemarrowmesenchyrmalstemcells,BMSCs)并對E
2、AT小鼠利用BMSCs進行尾靜脈注射治療,通過對治療組及對照組小鼠檢測血清TT3、TT4、甲狀腺球蛋白抗體(Thyroglobulinantibody,TgAb)、甲狀腺過氧化物酶抗體(Antithyroidperoxidaseantibodies,TPOAb)、甲狀腺微粒體抗體(ThyroidmicrosomalAutoantibody,TMAb)及甲狀腺病理并對結(jié)果進行分析比較,初步探討同源BMSCs對EAT的治療效果。
3、3.通過分析比較模型組與對照組小鼠干擾素γ(Interferon-γ,IFN-γ)與IL-17(Interleukine-17,IL-17)水平的差異以及BMSCs治療后的變化探討EAT的相關發(fā)病機理及BMSCs控制自身免疫反應的作用機制。
方法:6周齡雌性C57BL/6小鼠36只,體重(20±1)g,隨機分為模型治療組(A組)、單純模型組(B組)、正常對照組(C組)共三組,每組均為12只小鼠。于第0天用豬甲狀腺免疫球蛋白(P
4、orcineThyroglobulin,PTg)及完全弗氏佐劑(Freund'sadjuvantcomplete,CFA)對A組和B組進行初次免疫,于第14天用PTg及不完全弗氏佐劑(Freund'sadjuvantincomplete,IFA)對A組和B組進行再次免疫。并對A組于第0天,第7天、第14天、第21天進行BMSCs尾靜脈注射治療。BMSCs來自于同源C57BL/6小鼠,經(jīng)分離、培養(yǎng)、傳代、鑒定,獲得純化P3代BMSCs用于
5、實驗研究。三組小鼠均于實驗第28天摘眼球取血,測血清TT3、TT4、TgAb、TPOAb、TMAb、IFN-γ、IL-17水平,處死小鼠后分離甲狀腺組織,隨后進行甲狀腺組織HE染色及組織病理分析其甲狀腺淋巴細胞浸潤程度。
結(jié)果:
1.A組血清TgAb、TPOAb、TMAb水平及甲狀腺濾泡淋巴細胞浸潤程度較C組高,差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05);B組TgAb、TPOAb、TMAb水平及甲狀腺濾泡淋巴細胞浸潤程度較C
6、組高,差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05);A、B組TT4低于A組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);A組與B組、C組三組間比較TT3差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
2.A組與B組比較TgAb、TPOAb、TMAb水平以及甲狀腺濾泡淋巴細胞浸潤程度低,TT4較B組高,差異存在統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
3.A組、B組、C組三組間血清IFN-γ、IL-17水平相比差異存在統(tǒng)計學意義(P<0.05),B組水平明顯高
7、于A組及C組,而A組水平明顯高于C組(P<0.05)。
4.A組血清IFN-γ、IL-17水平與TPOAb水平存在正相關(P<0.05),B組血清IFN-γ、IL-17水平與TPOAb水平存在正相關(P<0.05)。
結(jié)論:
1.A組及B組小鼠經(jīng)兩次甲狀腺球蛋白聯(lián)合佐劑皮下免疫誘導后,實驗結(jié)束血清TgAb、TPOAb、TMAb水平較正常組小鼠水平高,TT4較正常組低,并且甲狀腺病理顯示濾泡間質(zhì)存在淋巴細胞浸
8、潤情況,具有典型EAT特征,提示免疫誘導造模成功。
2.A組小鼠甲狀腺自身抗體-TgAb、TPOAb、TMAb水平,促炎細胞因子IFN-γ、IL-17水平,甲狀腺組織淋巴細胞浸潤程度低于B組,TT4高于B組,提示同源BMSCs對EAT小鼠具有治療作用,保護甲狀腺組織抵抗免疫誘導損傷,防止自身免疫破壞作用。但BMSCs對EAT詳細的作用機理仍有待于進一步探索。
3.A組及B組血清IFN-γ、IL-17細胞因子水平均高于
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