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1、目的意義:信號轉(zhuǎn)導(dǎo)異常與疾病的關(guān)系是目前疾病發(fā)病機(jī)制的研究熱點(diǎn).放射性肺損傷(RPI)相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制尚未見研究報(bào)導(dǎo).TGF β是其發(fā)生發(fā)展過程中的"開關(guān)"性分子,并被作為治療的靶分子.Smad通路是TGFβ的主要且特異的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路.該課題對RPI過程中TGFβ的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行研究,不僅可以進(jìn)一步揭示該病的發(fā)病機(jī)制,也將有助于拓寬防治新途徑,發(fā)現(xiàn)防治新措施.材料和方法:該課題將動物實(shí)驗(yàn)和離體細(xì)胞實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,分別施加γ射線,TGFβ1
2、,SB203580和WP631等多種處理因素,采用免疫印跡、免疫組織化學(xué)、免疫共沉淀和EMSA等信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究方法與RT-PCR、病理學(xué)技術(shù)及MTT和細(xì)胞周期FACS檢測等細(xì)胞生物學(xué)行為研究手段相結(jié)合進(jìn)行研究.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:(1)γ射線照射大鼠肺臟病變經(jīng)歷炎癥-細(xì)胞增生-局灶性纖維化.(2)Smad3,4和7蛋白表達(dá)于大鼠肺組織中巨噬細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞、LF等多種細(xì)胞,表達(dá)水平于照射后1w升高,持續(xù)至3m.Smad3和4的表達(dá)部位在照射后1d
3、和3m由胞漿向胞核轉(zhuǎn)位.(3)TGF β靶基因產(chǎn)物或效應(yīng)發(fā)揮標(biāo)志物PAI-1,α-SMA和PCNA在肺組織的表達(dá)隨著病變進(jìn)展而增多.(4)一定劑量γ射線促進(jìn)RLF增殖、轉(zhuǎn)化及Ⅰ型膠原和PAI-1表達(dá)增多,同時(shí)促進(jìn)Smad3-4復(fù)合物的形成及核轉(zhuǎn)位;一定濃度TGFβ<,1>作用于照射后RLF,可進(jìn)一步促進(jìn)其Ⅰ型膠原和PAI-1的表達(dá);Smad3和P-Smad3表達(dá)增加,并進(jìn)一步促進(jìn)Smad3-4復(fù)合物的形成及核轉(zhuǎn)位,兩種處理因素均可促進(jìn)轉(zhuǎn)
4、錄因子Smad3-4,SPl和APl的活化.(5)SB203580或WP631預(yù)處理的RLF,再經(jīng)γ射線照射和TGFβ<,1>作用后,S期細(xì)胞、Ⅰ型膠原合成和P-Smad3表達(dá)減少,轉(zhuǎn)錄因子Smad3-4,SPl和APl的活化被抑制.結(jié)論:(1)TGFβ的Smad信號通路在大鼠RPI進(jìn)展過程中呈動態(tài)變化并活化,該通路的活化參與介導(dǎo)RPI的發(fā)生發(fā)展.(2)一定劑量γ射線照射促進(jìn)LF中TGF β-Smad信號通路的活化,該通路的活化參與介導(dǎo)
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