前房?jī)?nèi)免疫微環(huán)境的動(dòng)態(tài)變化與角膜移植免疫排斥反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 研究前房?jī)?nèi)免疫微環(huán)境的動(dòng)態(tài)變化與角膜移植免疫排斥反應(yīng)的關(guān)系。
　　 方法：
　　 建立小鼠穿透性角膜移植術(shù)(PKP)模型。60只BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組：異系PKP組（A組）、異系PKP+FK506前房植入組（B組）和原位PKP組（C組），術(shù)后裂隙燈觀察各組是否有植片免疫排斥發(fā)生及排斥時(shí)間，病理學(xué)檢測(cè)3天、7天及植片免疫排斥時(shí)各組角膜植片及虹膜睫狀體內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)情況；免疫熒光法檢測(cè)3天、7天及植

2、片免疫排斥時(shí)各組植片及虹膜睫狀體內(nèi)CD4+T細(xì)胞及MHC-Ⅱ+細(xì)胞的表達(dá)；Real-timeRT-PCR檢測(cè)A組及B組7天、14天、21天虹膜睫狀體內(nèi)CD4+T細(xì)胞的亞群--Th1及Th17細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子(IFN-γ和IL-17)和特征性轉(zhuǎn)錄因子（T-bet和RORγt）的mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 A組植片發(fā)生植片免疫排斥的平均時(shí)間為16.18±4.81天，B組和C組未見明顯的免疫排斥反應(yīng)發(fā)生。組織病

3、理學(xué)顯示A組3天時(shí)角膜緣出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，并可見炎癥細(xì)胞粘附于角膜內(nèi)皮面，角膜植片未見明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)；7天時(shí)除角膜緣有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)外，可見前房角內(nèi)多量淋巴細(xì)胞，部分粘附于角膜內(nèi)皮，角膜植片未見明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)；植片免疫排斥時(shí)角膜緣無明顯炎細(xì)胞浸潤(rùn)，植片內(nèi)可見大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，且有大量新生血管長(zhǎng)入。B組及C組3天、7天及A組植片免疫排斥同時(shí)間點(diǎn)時(shí)僅角膜緣有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，前房及角膜內(nèi)皮和角膜植片均未見明顯炎細(xì)胞。免疫熒光示A組術(shù)后3天僅少量CD

4、4+、MHC-Ⅱ+細(xì)胞沿虹膜睫狀體走形，角膜植片無表達(dá)；7天時(shí)可見虹膜睫狀體、前房角及角膜緣多量CD4+、MHC-Ⅱ+細(xì)胞聚集，角膜植片無明顯表達(dá)；角膜植片排斥時(shí)可見虹膜睫狀體及角膜植片大量CD4+細(xì)胞表達(dá)，并可見前房?jī)?nèi)CD4+細(xì)胞團(tuán)，MHC-Ⅱ+細(xì)胞在虹膜睫狀體、角膜緣及角膜植片少量表達(dá)。B組虹膜睫狀體及角膜植片均未見明顯CD4+、MHC-Ⅱ+細(xì)胞表達(dá)。C組僅7天時(shí)在虹膜及角膜緣有CD4+、MHC-Ⅱ+表達(dá)，余時(shí)間點(diǎn)均無明顯表達(dá)。Re

5、al-timeRT-PCR示A組術(shù)后7天IL-17mRNA及其轉(zhuǎn)錄因子RORγt明顯升高，術(shù)后14天及21天IFN-γ及其轉(zhuǎn)錄因子T-bet表達(dá)逐漸上升，IL-17mRNA及其轉(zhuǎn)錄因子RORγt水平逐漸下降;前房FK506-DDS植入組細(xì)胞因子及其轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)水平在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)均處于低水平，未見明顯變化。
　　 結(jié)論：
　　 前房?jī)?nèi)免疫微環(huán)境的動(dòng)態(tài)失衡是引起角膜移植免疫排斥的主要因素。虹膜睫狀體-角膜內(nèi)皮途徑輸送免疫活性