兒童糞便分離大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs和PMOR的檢測.pdf

1、目的:本研究通過對兒童糞便標(biāo)本分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶和質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮耐藥(PMQR)基因的檢測，明確兒童腸道中大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌中ESBLs和PMQR基因的攜帶情況;通過脈沖場凝膠電泳(PFGE)和多位點(diǎn)序列分型(MLST)等，了解耐藥菌株之間的分子流行病學(xué)情況。
　　方法:紙片擴(kuò)散法篩選耐藥菌株;瓊脂稀釋法測定抗生素最低抑菌濃度(MIC);PCR擴(kuò)增β-內(nèi)酰胺酶（blaTEM、blaSHV和blaC

2、TX-M）和PMQR(qepA、qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、aac(6')-Ib、oqxA和oqxB）基因，研究細(xì)菌對頭孢菌素類抗生素和喹諾酮類抗生素耐藥的分子機(jī)制;脈沖場凝膠電泳(PFGE)、多位點(diǎn)序列分型(MLST)和系統(tǒng)發(fā)育分型（phylogenetic group）等分子分型研究菌株之間的同源性關(guān)系。
　　結(jié)果:兒童糞便分離的腸桿菌科細(xì)菌以大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌最為常見。從114份兒童糞便標(biāo)本共分離

3、到98株(64.9％)大腸埃希菌和18株(11.9％)肺炎克雷伯菌。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率分別為45.9％(45/98)和38.9％(7/18)。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌以CTX-M-14和CTX-M-55基因型為主。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌以CTX-M-14和CTX-M-15基因型為主。首次在臨床菌株中發(fā)現(xiàn)了blaCTX-M-104基因，以及檢測到了嵌合重組型blaCTX-M-123。系統(tǒng)發(fā)育分型顯示，產(chǎn)ESBLs大

4、腸埃希菌以D型為主(42.2％，19/45)，其次為A型(26.7％，12/45)，B2型(20％，9/45)，B1型(11.1％，5/45)。MLST分型顯示，產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌以CC10、ST38、ST131、ST648和ST69為主，發(fā)現(xiàn)了1種新型ST型。7株產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的ST型均不同，同時發(fā)現(xiàn)了3種新型ST型。PFGE表明產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌均為不同克隆菌株。兒童腸道中大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對環(huán)

5、丙沙星的耐藥率分別為27.6％(27/98)和5.6％(1/18)。PMQR的檢出率為6.9％(8/116)，其中oqxAB、qnrS1和aac(6')-Ib-cr的檢出率分別為4.3％(5/116)、2.5％(3/116)和2.5％(3/116)。所有PMQR均在產(chǎn)ESBLs菌株中檢出，aac(6')-b-cr，oqxAB和qnrS1為本研究中主要的PMQR型。
　　結(jié)論:兒童糞便分離的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對頭孢菌素類和喹諾

6、酮類抗生素的耐藥率均非常高。腸桿菌科細(xì)菌ESBLs攜帶率高達(dá)37.7％，基因型以blaCTX-M-14和blaCTX-M-55為主。CTX-M型ESBLs的產(chǎn)生是腸桿菌科細(xì)菌對頭孢菌素類抗生素耐藥的主要原因。產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌以B2-ST131，D-ST648，D-ST38，A-CC10，D-ST69為主要的ST型。兒童腸道PMQR攜帶率為13.4％(7/52)，PMQR的檢出率為6.9％(8/116)?；蛑饕╝ac(6')-