碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌耐藥機(jī)制及同源性分析.pdf

1、目的:
　　探討臨床分離的碳青霉烯類耐藥肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐藥機(jī)制及同源性。
　　方法:
　　收集南昌地區(qū)四家教學(xué)醫(yī)院耐碳青霉烯類抗生素(亞胺培南和/或美羅培南)的肺炎克雷伯菌29株,雙紙片增效法檢測ESBLs(超廣譜β-內(nèi)酰胺酶)、三維實(shí)驗(yàn)檢測AmpC酶、改良Hodge實(shí)驗(yàn)和雙紙片協(xié)同法檢測碳青霉烯酶,聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增耐藥基因,并對擴(kuò)增產(chǎn)物測序,確定其基因型。接合試驗(yàn)評價(jià)耐藥質(zhì)粒的可轉(zhuǎn)移性。脈沖場凝

2、膠電泳(PFGE)對其進(jìn)行同源性分析。采用多位點(diǎn)序列分型技術(shù)(MLST)對CRKP進(jìn)行分子遺傳學(xué)分析,應(yīng)用eBURST軟件對多位點(diǎn)序列分型結(jié)果進(jìn)行其種群結(jié)構(gòu)分析。
　　結(jié)果:
　　29株實(shí)驗(yàn)菌中有19株攜帶碳青霉烯酶基因,占65.5％(19/29),以 blaKPC-2為主(44.8%,13/29),其次為blaNDM-1、blaIPM-26及blaIPM-4,攜帶率分別為17.2%、10.3%及6.9%,另還有3株同時(shí)攜帶

3、blaKPC-2和blaIPM-26,1株同時(shí)攜帶blaKPC-2和blaIPM-4。17株除攜帶碳青霉烯酶基因外,還攜帶ESBLs基因和(或)AmpC基因,占58.6%。未檢測到VIM、GES、SPM及OXA等其他碳青霉烯酶基因。PMQR(質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因)檢出率為48.3%(14/29),其中qnrB5株,包括qnrB21株、qnrB43株、qnrB101株;qnrS5株,均為qnrS1;1株同時(shí)攜帶 qnrS1和qnrB

4、4;aac(6')-Ib-cr3株。8株16S rRNA甲基化酶基因陽性,其中7株armA陽性,1株rmtB陽性。KP25外膜蛋白基因Ompk35缺失,其他實(shí)驗(yàn)株Ompk35、Ompk36均未缺失。29株實(shí)驗(yàn)菌中有27株被PFGE成功分型,分別屬于20個(gè)不同克隆,其余2株分型不成功,屬于同一克隆型且攜帶 blaKPC-2基因的4株菌來源同一醫(yī)院。29株CRKP被MLST成功分成16個(gè)ST型,以ST11和ST15為主(各5株),其次ST3

5、95(3株),ST334、ST273、ST147(各2株,),ST1128、ST42、ST1031、ST764、ST629和ST37(各1株),另有4個(gè)新的ST型已被Pubmlst數(shù)據(jù)庫確認(rèn)收錄并分別命名為ST1369、ST1411、ST1412和ST1413。29株實(shí)驗(yàn)菌對阿米卡星的耐藥率較低外(37.9%),對其他15種測試抗菌藥物的耐藥率均大于69%,其中對頭孢呋辛、亞胺培南的耐藥率為100%,多重耐藥肺炎克雷伯菌的檢出率為62.

6、1%(18/29)。
　　結(jié)論:
　　CRKP耐藥及多重耐藥性嚴(yán)重,通過29株實(shí)驗(yàn)菌對臨床常用的16種測試抗菌藥物耐藥率的篩選,結(jié)果顯示阿米卡星的耐藥率最低(37.9%),提示臨床可以把阿米卡星選為治療 CRKP感染最有效的抗生素。攜帶碳青霉烯酶基因是肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯類抗生素的主要原因65.5%(19/29),以 blaKPC-2為主(44.8%,13/29);尤為明顯的是29株CRKP中有5株攜帶blaNDM,明顯高