組織工程皮膚修復大鼠皮膚缺損的實驗研究.pdf

1、目的：將組織工程皮膚(TES)移植于SD大鼠全層皮膚缺損，旨在觀察創(chuàng)面愈合情況，從而探討TES修復皮膚缺損的可行性及有效性，并為TES的臨床應用提供實驗依據(jù)。 方法： 1 實驗對象及分組：成年健康雌性清潔級SD大鼠64只，隨機分為4組，每組16只。A組(TES移植組)， B組(自體全厚皮片移植組)，C組(空白膠原膜片移植組)，D組(以凡士林紗布覆蓋創(chuàng)面)。 2 動物全層皮膚缺損模型的建立：用常規(guī)手術方法于大鼠背部

2、切取全層皮膚形成圓形創(chuàng)面，直徑2.5cm，創(chuàng)面止血后，以生理鹽水紗布覆蓋備用。 3 手術方法：按實驗設計分別對各組動物行手術覆蓋創(chuàng)而，使移植物與創(chuàng)面貼合緊密，創(chuàng)面四周絲線間斷縫合，并打包固定。術后動物單籠常規(guī)飼養(yǎng)，間斷換藥。 4 術后觀察方法及指標：(1)計算術后第4周A、B兩組皮片成活率(％)；(2)分別于術后15和30天用膠片網(wǎng)格法測量各組創(chuàng)面實際面積，計算創(chuàng)面愈合率(％)；(3)記錄各組創(chuàng)面完全愈合時間(d)。

3、 5 組織學觀察時相及取材方法：分別于術后10、20、30和40天，用直徑2.0mm角膜環(huán)鉆切取各移植區(qū)邊緣全層皮膚標本，行HE染色，光鏡下觀察各組標本組織結構的變化。 6 統(tǒng)計分析：本研究所有數(shù)據(jù)均采用SAS V6.12統(tǒng)計分析軟件進行分析，計數(shù)資料采用Fisher’s確切概率法檢驗；計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，進行方差分析(F檢驗)或T檢驗。P<0.05，表示差別顯著。 結果： 1 移植部位情況

4、：A組：3例失敗，其余皮片成活，于術后35天時仍未發(fā)生排斥反應，創(chuàng)面平整，彈性較好，部分有皮屑脫落，無明顯瘢痕形成，顏色與正常皮膚相似，與周圍皮膚融為一體，無毛發(fā)生長。B組：失敗1例，其余皮片成活，術后30天左右創(chuàng)面愈合，無色素沉著，有皮屑脫落，有毛發(fā)生長，皮片與周邊皮膚完全融合。C組：4例創(chuàng)面感染，空白膠原膜片逐漸降解或脫落，無法辨認，創(chuàng)面瘢痕愈合。D組：1例動物死亡，創(chuàng)面瘢痕愈合。 2 皮片成活率：術后4周A組皮片成活率為8

5、1.25％，B組為93.75％；組間比較兩者無顯著性差異(P>0.05)。 3 創(chuàng)面愈合率：術后15天各組創(chuàng)面愈合率分別為：A組75.54±6.85％，B組81.97±6.32％，C組41.90±4.94％，D組42.99±6.63％。術后30天各組創(chuàng)面愈合率分別為：A組94.23±8.86％，B組99.08±9.06％，C組80.07±6.55％，D組78.04±8.21％。術后15和30天分別做組間比較，A組創(chuàng)面愈合率均小于

6、B組(P<0.05)而明顯大于C組(P<0.01)和D組(P<0.01)；C組與D組間無差別(P>0.05)。 4 創(chuàng)面愈合時間：各組創(chuàng)面愈合時間分別為：A組33.8±4.6天，B組27.1±3.6天，C組45.5±5.9天，D組48.1±6.0天。組間比較A組創(chuàng)面愈合時間長于B組(P<0.05)，明顯短于C組(P<0.01)和D組(P<0.01)；C組與D組間無差、別(P>0.05)。 5 組織學觀察：A組：表皮層較薄

7、，但結構較完整，角化層不明顯，后表皮層逐漸增厚，層次逐漸清晰；真皮內(nèi)FB排列整齊，膠原纖維量逐漸增多，橫向排列有序，炎性細胞罕見，真皮內(nèi)有大量的血管生成，且新生血管腔逐漸擴大、管壁逐漸增厚；表皮層與真皮層交界處可見釘突形成，兩層結構結合緊密。B組：細胞層次清晰，組織結構完整，與正常皮膚相似。C組和D組：創(chuàng)面有大量膠原纖維生長，逐漸形成瘢痕組織。 結論： 1 TES具有表皮和真皮雙層結構，類似于正常皮肽，又具備較好的物理性

8、狀，有一定的彈性、韌性、伸展性，適于手術操作，因此，可作為全層皮膚替代物修復皮膚缺損。 2 TES移植于皮膚創(chuàng)而后未發(fā)生明顯排斥反應，能較早實現(xiàn)血管化，逐漸被改建并與受體創(chuàng)面組織融合，皮片成活率較高，與自體全厚皮膚移植無明顯差別，因此，用TES修復全層皮膚缺損是可行的。 3 TES修復的創(chuàng)而愈合時間較對照組明顯縮短，愈合效果也明顯好于對照組，說明TES有促進創(chuàng)面愈合的作用。但與自體全厚皮膚移植相比，愈合時間仍較長，效果欠

9、佳，說明TES在結構和生理功能上與正常皮膚差別仍較大，距離構建理想的永久性皮膚替代物還有很大差距。 4 TES移植失敗可能與其自身的局限性有關，TES在結構和功能上都有一些缺陷，如缺乏免疫功能，抗感染能力較差：無血管系統(tǒng)，移植后血管化緩慢；表皮層較薄，真皮層與表皮層間的連接不夠穩(wěn)定，耐摩性較差；膠原支架的韌性及強度不如自體皮膚等，這些局限性降低了TES移植成活率。在不斷改進TES構建方法的同時，實際應用時應根據(jù)創(chuàng)面情況和TES的