鳥氨酸脫羧酶基因表達(dá)與卵巢癌關(guān)系的研究.pdf

1、[目的] 卵巢癌是女性生殖道腫瘤中病死率最高的疾病，采用目前的治療方法，即使經(jīng)過徹底的手術(shù)治療和輔助化療，晚期患者5年生存率僅為15％。研究卵巢癌相關(guān)的預(yù)測指標(biāo)將有重要意義。鳥氨酸脫羧酶(ornithinedecarboxylase，ODC)是多胺生物合成的限速酶，通過調(diào)節(jié)多胺含量影響細(xì)胞增殖分化，其活性增高與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。本研究采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫組化方法對卵巢良惡性腫瘤組織中的ODCmR

2、NA以及相應(yīng)蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測，結(jié)合其臨床病理學(xué)指標(biāo)進(jìn)行分析，旨在從轉(zhuǎn)錄和翻譯水平初步探討ODC基因在卵巢腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及其在卵巢癌診斷中的價值，并為臨床卵巢癌基因治療提供理論依據(jù)。 [材料與方法] 1.RT-PCR隨機(jī)選擇卵巢癌32例，卵巢良性腫瘤26例，正常卵巢17例。按照Trizol試劑盒的說明提取組織中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄(RT)合成cDNA用作PCR的模板DNA，以β-actin基因作為內(nèi)參照，使用特異性引

3、物進(jìn)行PCR。PCR產(chǎn)物行瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察電泳帶，凝膠成像分析系統(tǒng)掃描拍照。 2.免疫組化檢測卵巢良惡性腫瘤細(xì)胞中ODC蛋白的含量由山東大學(xué)齊魯醫(yī)院病理科提供病理切片，卵巢癌31例，卵巢良性腫瘤20例，正常卵巢6例。采用SABC法，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定在高倍鏡下進(jìn)行。陽性細(xì)胞比率≤10％記為(-)，10％～30％記為(+)，30％～60％記為(++)，＞60％記為(+++)。 [結(jié)果] ①所有卵巢

4、標(biāo)本中ODCmRNA的表達(dá)豐度均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示。卵巢癌ODCmRNA表達(dá)量較正常卵巢顯著升高，差異極顯著(P＜0.001)，ODC基因表達(dá)在卵巢良惡性腫瘤之間及良性腫瘤、正常卵巢之間均存在顯著性差異(P=0.045，P=0.044，P＜0.05)；卵巢癌Ⅲ+Ⅳ期ODCmRNA表達(dá)量較Ⅰ+Ⅱ期升高，統(tǒng)計學(xué)有極顯著差異(P=0.0095)。②免疫組化顯示ODC主要存在于細(xì)胞漿中，絕大多數(shù)(30/31)卵巢癌組織細(xì)胞內(nèi)可見棕黃色深染顆粒。

5、卵巢良惡性腫瘤及正常卵巢組織之間ODC蛋白表達(dá)差異顯著(X2=20.202，P＜0.0001)，良性卵巢腫瘤組陽性表達(dá)高于正常卵巢組，而卵巢癌組又高于良性腫瘤組(P＜0.05)：在卵巢癌組中，隨著組織學(xué)分級和臨床分期的增高，ODC蛋白的陽性表達(dá)遞增，有顯著性差異(P＜0.05)，不同病理類型的惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)染色未見明顯差異。③經(jīng)直線相關(guān)分析及Spearman等級相關(guān)分析檢驗證明，卵巢癌組織中ODCmRNA表達(dá)水平和ODC蛋白免疫組化的陽

6、性表達(dá)率呈相關(guān)關(guān)系(r=0.9062，P＜0.05)，且隨著腫瘤惡性程度的增高和臨床期別的增加，ODCmRNA表達(dá)水平和ODC蛋白的陽性表達(dá)率明顯增加(rs=0.9562，0.01＜P＜0.02)，具有統(tǒng)計學(xué)差異。因此，在某種意義上可以認(rèn)為，ODC蛋白的表達(dá)情況間接反映出mRNA表達(dá)水平。 [結(jié)論] 本文證明卵巢腫瘤組織中ODC基因表達(dá)增高，而惡性腫瘤組織中異常高表達(dá)，并隨著臨床分期及組織學(xué)分級的增高遞增，表明ODC基因