人MIG重組蛋白的制備及其防治化療骨髓毒副作用的研究.pdf

1、本研究的目的是開發(fā)防治化療骨髓保護(hù)作用的藥物，以應(yīng)對(duì)惡性腫瘤大劑量化療或者血液惡性病的治療過程中所帶來的骨髓抑制副作用。在本實(shí)驗(yàn)室前期工作的基礎(chǔ)上，我們利用原核表達(dá)pET系統(tǒng)表達(dá)了重組人的MIG蛋白，并利用離子交換層析方法純化出具有生物學(xué)活性的人MIG蛋白，為MIG的功能研究打下了基礎(chǔ)。 我們選取50ug/kg體重的劑量，連續(xù)5天給小鼠皮下注射rHuMIG，再連續(xù)3天給小鼠進(jìn)行腹腔注射5-Fu(100mg/kg體重/天)，觀察r

2、HuMIG對(duì)5-Fu化療小鼠的保護(hù)作用。對(duì)照組注射等體積生理鹽水。統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，提前注射rHuMIG可以將小鼠的存活時(shí)間由對(duì)照組的7.36天提高到9.91天，并且二者在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有極顯著差異(P=0.0046)。該實(shí)驗(yàn)證明了提前運(yùn)用rHtJMIG蛋白能夠提高小鼠對(duì)5-Fu的耐受力，對(duì)小鼠化療起到保護(hù)作用。 為了進(jìn)一步探討MIG保護(hù)骨髓的機(jī)制，我們對(duì)化療恢復(fù)期小鼠注射rHuMIG，然后分離其骨髓單個(gè)核細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)rHuM

3、IG能夠降低單個(gè)核細(xì)胞處于S期的比例。取正常小鼠的骨髓細(xì)胞，用Ficoll分離后體外進(jìn)行集落培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中加入rHuMIG的培養(yǎng)皿中集落總數(shù)降低。由此，我們推測(cè)rHuMIG通過抑制造血干、祖細(xì)胞進(jìn)入S期，從而避過S期敏感的化療藥物5-Fu的作用，使得化療過程中更多的干、祖細(xì)胞存留下來并進(jìn)入分裂增殖，加快骨髓的恢復(fù)。 CXCR3是MIG蛋白的受體，主要介導(dǎo)MIG完成趨化作用。我們檢測(cè)了21種腫瘤細(xì)胞表面CXCR3的表達(dá)情況，發(fā)

4、現(xiàn)其中有10種腫瘤細(xì)胞表面完全表達(dá)或部分表達(dá)CXCR3。通過MTT法檢測(cè)了rHuMIG對(duì)表達(dá)CXCR3和不表達(dá)CXCR3腫瘤細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)rHuMIG在體外不影響腫瘤細(xì)胞的增殖生長(zhǎng)。 我們選用了表達(dá)CXCR3的L1210和不表達(dá)CXCR3的LLC兩株腫瘤細(xì)胞，制作皮下腫瘤模型，在正常荷瘤小鼠模型中連續(xù)5天以50ug/kg體重的劑量皮下注射rHuMIG蛋白，觀察rHuMIG體內(nèi)對(duì)L1210和LLC腫瘤生長(zhǎng)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)rH

5、uMIG蛋白組的腫瘤重量和對(duì)照組相比無顯著差異。在正常L1210荷瘤模型中，第11天處死小鼠，和在化療L1210荷瘤模型中第9天處死小鼠，檢測(cè)其外周血白細(xì)胞，血小板以及骨髓細(xì)胞總數(shù)的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，和對(duì)照組相比，蛋白組小鼠的外周血白細(xì)胞，血小板以及骨髓細(xì)胞總數(shù)均有所下降，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無顯著差異。在LLC荷瘤小鼠化療模型中，化療前連續(xù)5天注射rHuMIG蛋白，在化療后第3、5、11天處死小鼠，檢測(cè)其外周血白細(xì)胞，血小板以及骨髓細(xì)胞總數(shù)的變

6、化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在化療后的第3天蛋白組白細(xì)胞下降(p值為0.14)，血小板和骨髓細(xì)胞均上升(p值分別為0.003、0.009)。第5天蛋白組白細(xì)胞、血小板和骨髓細(xì)胞的數(shù)目和對(duì)照比相差很小，且統(tǒng)計(jì)學(xué)上無差異。第11天蛋白組白細(xì)胞、血小板的數(shù)目和對(duì)照組相比均有所上升，蛋白組骨髓細(xì)胞和對(duì)照組相比有所下降，但蛋白組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和對(duì)照組相比在統(tǒng)計(jì)學(xué)上均無顯著差異?？赡艿脑颍茰y(cè)為腫瘤在體內(nèi)能分泌和造血相關(guān)的細(xì)胞因子，掩蓋了rHuMIG在化療過程中對(duì)造