MS易感基因、認(rèn)知障礙與細(xì)胞免疫治療機(jī)制的研究.pdf

1、多發(fā)性硬化（MS）是基因因素和環(huán)境因素共同參與的主要由T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。自然殺傷（NK）細(xì)胞是固有和適應(yīng)性免疫的重要的調(diào)節(jié)因素，在抑制細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫中有關(guān)鍵作用。MS患者NK細(xì)胞數(shù)量減少，并且有細(xì)胞因子產(chǎn)生缺陷。但由于很多疾病都與NK細(xì)胞缺陷有關(guān)，NK細(xì)胞在MS患者數(shù)量和功能的變化，是先于MS的發(fā)生還是MS的一個(gè)結(jié)局，還不確定。鑒于MS是一個(gè)基因易感性疾病，NK細(xì)胞表面的殺傷免疫球蛋白樣受體（KIR）基因及人類白細(xì)胞分化抗

2、原-C（HLA）是否參與MS的易感性，是第一部分的研究?jī)?nèi)容，旨在加深對(duì)MS發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。RT-PCR方法對(duì)MS患者與對(duì)照人群KIR和HLA-C配體基因的基因型進(jìn)行分析，并使用Odds Ratio（OR）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估來研究其對(duì)MS患病風(fēng)險(xiǎn)的影響。
　　 本研究發(fā)現(xiàn)MS患者攜帶抑制性KIR2DL2基因增高，并增加了MS的罹患風(fēng)險(xiǎn)。HLA-C1和HLA-C2配體單獨(dú)存在時(shí)，不影響MS的患病風(fēng)險(xiǎn)。HLA-C1配體存在時(shí)，KIR2DL2基因

3、對(duì)MS的患病風(fēng)險(xiǎn)增加，KIR2DL2主要通過與HLA-C1配體結(jié)合發(fā)揮MS易感作用。MS根據(jù)病變累及部位不同，臨床上可表現(xiàn)為多種癥狀和體征。MS患者中約40％-70％有認(rèn)知障礙，認(rèn)知障礙可以在病程早期出現(xiàn)，但由于MS患者的肢體運(yùn)動(dòng)功能障礙很突出，認(rèn)知損傷經(jīng)常被忽視，早期發(fā)現(xiàn)患者的認(rèn)知障礙并予以治療可提高患者的生活質(zhì)量。
　　 第二部分使用數(shù)字－符號(hào)模式測(cè)驗(yàn)(DSMT)、語義流暢性測(cè)試（SVFT）（動(dòng)物，水果/蔬菜）、數(shù)字廣度測(cè)試

4、（DST）檢查RRMS患者的認(rèn)知功能，研究發(fā)現(xiàn)MS患者早期有持續(xù)注意力、信息處理速度、記憶力和執(zhí)行功能損傷。胼胝體（CC）是連接兩個(gè)大腦半球的最大的白質(zhì)纖維束，在認(rèn)知和信息整合功能中有重要的作用，CC是否可以反映患者的認(rèn)知功能？本實(shí)驗(yàn)通過CC與認(rèn)知的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)穿過CC膝部、壓部和整個(gè)CC纖維束的容積、FA和DR值與認(rèn)知功能中度相關(guān)，可部分反應(yīng)認(rèn)知功能的改變。普通MRI（MRI）上的正常外觀腦白質(zhì)（NAWM），也有白質(zhì)纖維的早期損傷

5、，彌散擴(kuò)張纖維成像（DTT）技術(shù)是否可以更敏感的反應(yīng)白質(zhì)纖維的早期改變？本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)穿過MS患者病灶的神經(jīng)纖維有可見的結(jié)構(gòu)損傷，穿過病灶對(duì)側(cè)NAWM神經(jīng)纖維的FA值早期降低，提示FA值可以作為白質(zhì)早期改變的指標(biāo)之一。MS的治療一直很棘手，尤其對(duì)嚴(yán)重的MS類型。米托蒽醌（MX）是第一個(gè)被批準(zhǔn)用于惡性復(fù)發(fā)緩解型MS（RRMS），繼發(fā)進(jìn)展型MS（SPMS）和進(jìn)展復(fù)發(fā)型MS（PRMS）治療的細(xì)胞毒性藥物。
　　 小膠質(zhì)細(xì)胞

6、是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的巨噬細(xì)胞和抗原呈遞細(xì)胞，除了將抗原呈遞給侵入CNS的T細(xì)胞、再次激活T細(xì)胞外，小膠質(zhì)細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)入侵T細(xì)胞的亞型，從而促進(jìn)MS的發(fā)病過程。由于MX分子很小，在疾病狀態(tài)下極易通過損傷的血腦屏障（BBB），可以直接作用于CNS的細(xì)胞，MX對(duì)CNS小膠質(zhì)細(xì)胞的影響是第三部分研究的主要內(nèi)容。使用LPS激活BV2小膠質(zhì)細(xì)胞系，0，0.02，0.2，2，20，200 ng/ml的MX干預(yù)細(xì)胞。
　　

7、 MTT及細(xì)胞流式發(fā)現(xiàn)MX大于2 ng/ml時(shí)，以一種劑量依賴方式導(dǎo)致明顯的細(xì)胞死亡，細(xì)胞死亡的主要方式為晚期凋亡和壞死。繼而選取0.02和0.2 ng/ml MX進(jìn)一步研究其對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)的影響，Elisa方法檢測(cè)BV2細(xì)胞白介素-10（IL-10）和IL-23p19產(chǎn)生的變化。研究發(fā)現(xiàn)LPS單獨(dú)刺激增加BV2促炎性細(xì)胞因子IL-23p19的產(chǎn)生，不影響抗炎性細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)。0.02和0.2 ng/ml的MX下調(diào)BV

8、2細(xì)胞中IL-23p19的表達(dá)，并增加IL-10的產(chǎn)生。MX除了對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞有毒性作用外，也有免疫調(diào)節(jié)作用。這些發(fā)現(xiàn)為我們開發(fā)MS治療藥物提供了新思路。
　　 綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)KIR基因參與MS的易感性；RRMS患者早期有信息處理速度、記憶力、持續(xù)注意力和執(zhí)行功能等認(rèn)知功能損傷，穿過CC纖維束可部分反映認(rèn)知功能；MS患者病灶的神經(jīng)纖維有結(jié)構(gòu)損傷，NAWM神經(jīng)纖維的FA值早期降低，可以作為評(píng)估白質(zhì)早期改變的指標(biāo)之一；MX除了對(duì)