環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增檢測弓形蟲方法的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、目的：建立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡單快速、低成本檢測弓形蟲DNA的方法。 方法：采用環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)技術(shù)建立了檢測弓形蟲DNA的方法，并進(jìn)行特異性、敏感性評估，在此基礎(chǔ)上建立依據(jù)SYBR Green I的定量方法及通過顯色反應(yīng)直接判斷結(jié)果的簡便方法。為驗證我們建立方法的臨床應(yīng)用價值，最后用建立的方法對57例孕婦外周血標(biāo)本進(jìn)行了檢測。

2、 結(jié)果：通過對建立的LAMP擴(kuò)增弓形蟲DNA反應(yīng)體系的優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)鎂離子影響較大，其它如甜菜堿、溫度等影響不大。特異性評估表明僅弓形蟲檢測陽性，而豬肉絳蟲、血吸蟲等寄生蟲檢測為陰性，酶切鑒定結(jié)果進(jìn)一步證明了擴(kuò)增的特異性。敏感性檢測下限為每反應(yīng)管10拷貝。以重組質(zhì)粒制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示，循環(huán)閾值與模板濃度有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)0.929，擴(kuò)增效率0.961。對57例孕婦標(biāo)本檢測，發(fā)現(xiàn)2例陽性，定量檢測值均約103拷貝/μl。 結(jié)論