重組人p53腺病毒轉(zhuǎn)染K562-A02及其源性樹(shù)突狀細(xì)胞所誘導(dǎo)免疫效應(yīng)研究.pdf

1、目的：白血病是起源于血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，屬造血干細(xì)胞的惡性克隆性疾病。免疫學(xué)研究表明白血病的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體免疫之間存在密切的關(guān)系，通過(guò)免疫治療可徹底清除殘留的白血病細(xì)胞，達(dá)到根治目的。而白血病多藥耐藥(multidmg resistance，MDR)的產(chǎn)生是難治和復(fù)發(fā)的主要原因，目前尚無(wú)有效的臨床干預(yù)對(duì)策。樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cells，Dc)作為體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，是激發(fā)特異性免疫應(yīng)答的中心和腫瘤免疫的重要載體。研

2、究表明，p-170糖蛋白(p-glycoprotein)高表達(dá)的多藥耐藥白血病細(xì)胞可誘導(dǎo)分化為DC(耐藥白血病源性DC)，其介導(dǎo)產(chǎn)生針對(duì)多藥耐藥白血病細(xì)胞特異的細(xì)胞毒作用。但有許多資料表明，耐藥白血病源性DC與正常DC相比，其遷移、吞噬作用及抗原加工和細(xì)胞因子分泌等功能較弱，從而使其激發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答能力相對(duì)下降。因此如何促進(jìn)耐藥白血病源性DC成熟并增強(qiáng)其功能，在白血病細(xì)胞免疫研究和臨床治療中有著重要的理論和實(shí)踐意義。有研究報(bào)道腺病毒p

3、53修飾DC細(xì)胞可使其表達(dá)內(nèi)源性抗原、上調(diào)DC共刺激分子表達(dá)、刺激有效的細(xì)胞免疫應(yīng)答，產(chǎn)生特異性抗腫瘤效應(yīng)。故我們?cè)O(shè)想通過(guò)轉(zhuǎn)染重組人p53腺病毒以促進(jìn)耐藥白血病源性DC成熟，則可將此DC細(xì)胞自身攜帶的白血病特異性抗原遞呈給機(jī)體的免疫系統(tǒng)，來(lái)殺傷白血病細(xì)胞，同時(shí)可間接起到逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的作用。為了初步探討這一問(wèn)題，本研究擬以p53基因突變型白血病細(xì)胞株K562/A02(K562為慢性粒細(xì)胞白血病急性變細(xì)胞株，K562/A02是K562

4、經(jīng)阿霉素誘導(dǎo)生成的多藥耐藥細(xì)胞株)為研究對(duì)象，以野生型p53腺病毒和空載體腺病毒轉(zhuǎn)染該細(xì)胞，觀察外源性野生型p53對(duì)有p53基因突變的白血病細(xì)胞系的生長(zhǎng)抑制作用。并以該腺病毒p53修飾K562/A02源性DC，分別通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、免疫表型鑒定和功能變化來(lái)評(píng)價(jià)腺病毒p53對(duì)耐藥白血病源性DC的促成熟作用，激發(fā)特異性免疫反應(yīng)，進(jìn)行p53免疫治療的研究。 方法：在腺病毒介導(dǎo)下以野生型p53基N(wt-p53)轉(zhuǎn)染K562/A02，并以

5、空腺病毒載體為對(duì)照結(jié)果，以生長(zhǎng)曲線和3H-TdR摻入法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況觀察所轉(zhuǎn)染的野生型p53基因?qū)?xì)胞生長(zhǎng)的影響。同時(shí)由K562/A02細(xì)胞在IL-4、GM-CSF、THF-α聯(lián)合培養(yǎng)下誘導(dǎo)生成K562/A02源性DC細(xì)胞，在腺病毒介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染野生型p53基因，與同種異體淋巴細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)特異性CTL，并觀察其對(duì)K562/A02細(xì)胞系的殺傷效率。 結(jié)果：野生型p53基因轉(zhuǎn)染K562/A02細(xì)胞后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞生長(zhǎng)明顯減慢，其生長(zhǎng)受

6、抑率平均為22.63％，而轉(zhuǎn)染空腺病毒載體的細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯差異，說(shuō)明野生型p53基因和細(xì)胞基因組整合后，補(bǔ)充了因p53突變而喪失的功能，對(duì)細(xì)胞周期進(jìn)行負(fù)調(diào)控，使惡性腫瘤生長(zhǎng)受到抑制。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)腺病毒介導(dǎo)野生型p53基因轉(zhuǎn)染K562/A02源性DC后，成熟DC的表面標(biāo)志CD83、CD1a、CD86、CD80、HLA-DR顯著升高。基因修飾后DC可有效刺激混合淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)。p53基因轉(zhuǎn)染后DC與同種異體淋巴細(xì)胞聯(lián)合培

7、養(yǎng)后作為效應(yīng)細(xì)胞，以K562/A02作為靶細(xì)胞進(jìn)行殺傷實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，當(dāng)效靶比為20：1，10:1，5:1時(shí)，p53基因轉(zhuǎn)染K562/A02-DC所誘導(dǎo)特異性殺傷細(xì)胞(T-Adp53-K562/A02-DC)與T-IL-2細(xì)胞非特異性殺傷的殺傷率有顯著性差異。而空腺病毒載體轉(zhuǎn)染DC細(xì)胞所誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(T-AdLacZ-K562/A02-DC)與T-IL-2非特異性細(xì)胞的殺傷率無(wú)顯著性差異。 結(jié)論：研究表明，wt-p53基因可對(duì)