重組人p53腺病毒轉(zhuǎn)染K562-A02及其源性樹突狀細胞所誘導免疫效應研究.pdf

1、目的：白血病是起源于血液系統(tǒng)的惡性腫瘤，屬造血干細胞的惡性克隆性疾病。免疫學研究表明白血病的發(fā)生發(fā)展與機體免疫之間存在密切的關系，通過免疫治療可徹底清除殘留的白血病細胞，達到根治目的。而白血病多藥耐藥(multidmg resistance，MDR)的產(chǎn)生是難治和復發(fā)的主要原因，目前尚無有效的臨床干預對策。樹突狀細胞(dendritic cells，Dc)作為體內(nèi)功能最強的抗原遞呈細胞，是激發(fā)特異性免疫應答的中心和腫瘤免疫的重要載體。研

2、究表明，p-170糖蛋白(p-glycoprotein)高表達的多藥耐藥白血病細胞可誘導分化為DC(耐藥白血病源性DC)，其介導產(chǎn)生針對多藥耐藥白血病細胞特異的細胞毒作用。但有許多資料表明，耐藥白血病源性DC與正常DC相比，其遷移、吞噬作用及抗原加工和細胞因子分泌等功能較弱，從而使其激發(fā)抗腫瘤免疫應答能力相對下降。因此如何促進耐藥白血病源性DC成熟并增強其功能，在白血病細胞免疫研究和臨床治療中有著重要的理論和實踐意義。有研究報道腺病毒p

3、53修飾DC細胞可使其表達內(nèi)源性抗原、上調(diào)DC共刺激分子表達、刺激有效的細胞免疫應答，產(chǎn)生特異性抗腫瘤效應。故我們設想通過轉(zhuǎn)染重組人p53腺病毒以促進耐藥白血病源性DC成熟，則可將此DC細胞自身攜帶的白血病特異性抗原遞呈給機體的免疫系統(tǒng)，來殺傷白血病細胞，同時可間接起到逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥的作用。為了初步探討這一問題，本研究擬以p53基因突變型白血病細胞株K562/A02(K562為慢性粒細胞白血病急性變細胞株，K562/A02是K562

4、經(jīng)阿霉素誘導生成的多藥耐藥細胞株)為研究對象，以野生型p53腺病毒和空載體腺病毒轉(zhuǎn)染該細胞，觀察外源性野生型p53對有p53基因突變的白血病細胞系的生長抑制作用。并以該腺病毒p53修飾K562/A02源性DC，分別通過形態(tài)學觀察、免疫表型鑒定和功能變化來評價腺病毒p53對耐藥白血病源性DC的促成熟作用，激發(fā)特異性免疫反應，進行p53免疫治療的研究。 方法：在腺病毒介導下以野生型p53基N(wt-p53)轉(zhuǎn)染K562/A02，并以

5、空腺病毒載體為對照結(jié)果，以生長曲線和3H-TdR摻入法檢測細胞增殖情況觀察所轉(zhuǎn)染的野生型p53基因?qū)毎L的影響。同時由K562/A02細胞在IL-4、GM-CSF、THF-α聯(lián)合培養(yǎng)下誘導生成K562/A02源性DC細胞，在腺病毒介導下轉(zhuǎn)染野生型p53基因，與同種異體淋巴細胞聯(lián)合培養(yǎng)誘導特異性CTL，并觀察其對K562/A02細胞系的殺傷效率。 結(jié)果：野生型p53基因轉(zhuǎn)染K562/A02細胞后，發(fā)現(xiàn)細胞生長明顯減慢，其生長受

6、抑率平均為22.63％，而轉(zhuǎn)染空腺病毒載體的細胞和未轉(zhuǎn)染的細胞生長無明顯差異，說明野生型p53基因和細胞基因組整合后，補充了因p53突變而喪失的功能，對細胞周期進行負調(diào)控，使惡性腫瘤生長受到抑制。進一步研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)腺病毒介導野生型p53基因轉(zhuǎn)染K562/A02源性DC后，成熟DC的表面標志CD83、CD1a、CD86、CD80、HLA-DR顯著升高?；蛐揎椇驞C可有效刺激混合淋巴細胞增殖反應。p53基因轉(zhuǎn)染后DC與同種異體淋巴細胞聯(lián)合培

7、養(yǎng)后作為效應細胞，以K562/A02作為靶細胞進行殺傷實驗，結(jié)果表明，當效靶比為20：1，10:1，5:1時，p53基因轉(zhuǎn)染K562/A02-DC所誘導特異性殺傷細胞(T-Adp53-K562/A02-DC)與T-IL-2細胞非特異性殺傷的殺傷率有顯著性差異。而空腺病毒載體轉(zhuǎn)染DC細胞所誘導的殺傷細胞(T-AdLacZ-K562/A02-DC)與T-IL-2非特異性細胞的殺傷率無顯著性差異。 結(jié)論：研究表明，wt-p53基因可對