SOD3和NOS3基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、前言：
　　 原發(fā)性高血壓(Essential Hypertension,EH)是一種嚴(yán)重威脅人們生活質(zhì)量的多基因復(fù)雜疾病,同時(shí)也是心血管疾病、腦血管疾病以及腎臟疾病發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。作為一種常見(jiàn)復(fù)雜疾病,原發(fā)性高血壓的發(fā)生發(fā)展受到遺傳因素與環(huán)境因素的共同調(diào)控。近年來(lái)很多報(bào)道表明氧化應(yīng)激在高血壓的發(fā)生發(fā)展中起到了重要的作用。氧化應(yīng)激由體內(nèi)活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)增多或者抗氧化酶活性的降

2、低所致。在心血管系統(tǒng)中最主要的抗氧化酶是胞外超氧化物歧化酶(Extracellular superoxide dismutase,EC-SOD,或SOD3),其可以催化超氧陰離子(·O2-)形成過(guò)氧化氫(H2O2)。心血管系統(tǒng)中另一重要的氧化應(yīng)激相關(guān)因子是內(nèi)皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS,或NOS3),其對(duì)于血壓的調(diào)節(jié)具有雙重作用:一方面,NOS3通過(guò)產(chǎn)生NO,舒張血管,降低

3、血壓;另一方面,當(dāng)缺少底物L(fēng)-精氨酸或輔因子四氫葉酸時(shí),解偶聯(lián)的NOS3可以產(chǎn)生·O2-,后者又可氧化NO,形成過(guò)氧化亞硝酸鹽(ONOO-),繼而起到促高血壓作用。以往關(guān)于SOD3基因和NOS3基因多態(tài)性與高血壓的關(guān)聯(lián)研究報(bào)道結(jié)果不一,為明確這兩個(gè)氧化應(yīng)激相關(guān)基因在高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用,我們?cè)谥袊?guó)東北漢族人群中對(duì)這兩個(gè)基因進(jìn)行了關(guān)聯(lián)研究,并進(jìn)行了初步的功能鑒定。
　　 材料與方法
　　 一、研究對(duì)象
　　 研究

4、對(duì)象分為兩部分:臨床樣本共計(jì)80人(高血壓54人,健康對(duì)照26人),來(lái)自盛京醫(yī)院循環(huán)內(nèi)科;病例.對(duì)照人群共計(jì)553人,其中高血壓組298人(男124人,女165人),健康對(duì)照組264人(男103人,女161人),來(lái)自遼寧省彰武縣高血壓病高發(fā)區(qū)漢族人群。
　　 二、實(shí)驗(yàn)方法
　　 1、應(yīng)用Flexigene DNA提取試劑盒提取基兇組DNA,檢測(cè)OD260/280,確定基因組DNA濃度和純度。
　　 2、采用Rea

5、l-time PCR技術(shù),檢測(cè)SOD3基因c.172G＞A(p.Ala58Thr,rs2536512)和NOS3基因c.894G＞T(p.Glu298Asp,m1799983)多態(tài)位點(diǎn)的基因型。
　　 3、應(yīng)用南京建成生物工程有限公司商品化試劑盒檢測(cè)血漿總SOD活性和NO濃度。
　　 4、所有統(tǒng)計(jì)學(xué)運(yùn)算由SPSS13.0 for windows軟件完成,臨床計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示;計(jì)數(shù)資料的關(guān)聯(lián)分析和Hardy-We

6、inberg平衡檢驗(yàn)用x2-檢驗(yàn);兩組間計(jì)量資料比較使用獨(dú)立樣本t-檢驗(yàn),三組間比較使用One-wayANOVA:基因型與高血壓之間的相對(duì)危險(xiǎn)度用優(yōu)勢(shì)比(Odds ratio,OR)表示;P＜0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、臨床樣本中EH組與對(duì)照組間性別和年齡分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。除收縮壓(Systolic Blood Pressure,SBP)和舒張壓(Diastolic Blood Pressur

7、e,DBP)外,血清甘油三酯(Serum triglyeeride,TG)和低密度膽固醇(Low-density LipoproteinCholesterol,LDL-chol)在EH組中顯著升高(P＜0.05);而高密度膽固醇(High-densityLipoprotein Cholesterol,HDL-chol)在EH組明顯低于正常對(duì)照組(P＜0.05)。此外,血清總膽固醇(Total cholesterol,T-chol)、血糖

8、(Glucose,Glu)、尿素氮(UreaNitrogen,BUN)和肌酐(Creatinine,CREA)在EH組和對(duì)照組中分布沒(méi)有明顯差異(P＞0.05)。
　　 2、臨床樣本中SOD3基因c.172G＞A多態(tài)性基因型和等位基因的分布符合Hardy-Weinberg平衡。GG純合子SOD活性明顯低于GA雜合子(P=0.042)以及A等位基因攜帶者(P=0.031)。按性別分組發(fā)現(xiàn),男性C.172G＞A多態(tài)性與SOD活性相關(guān)

9、(P=0.002),男性GG純合子SOD活性明顯低于GA雜合子(P=0.002)以及A等位基因攜帶者(P=0.003);而女性G等位基因攜帶者SOD活性顯著低于AA純合子(P=0.034)。此外,臨床樣本SOD3基因c.172G＞A態(tài)性等位基因和基因型的分布存EH組和對(duì)照組中存在顯著性籌異。G等位基岡在EH組中的頻率明顯高于對(duì)照組(P=0.021);EH組GG純合子頻率明顯高于對(duì)照組(OR=0.196,95％CI:0.045-0.861

10、,P=0.020)。Logistic回歸分析顯示,調(diào)整高血壓相關(guān)因素,包括血清TG、HDL-chol和LDL-chol后,GG基因型仍為EH發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(OR=6.247,95％CI,1.242-31.432,P=0.026)。
　　 3、臨床樣本中NOS3基因c.894G＞T多態(tài)性基因型和等位基因的分布符合Hardy-Weinberg平衡。在總體人群中,c.894G＞T多態(tài)與NO濃度相關(guān)(P=0.015),GG純合子NO

11、濃度(129.66±59.15μmol/L)顯著低于GT雜合子(176.10±54.84μmol/L,P=0.005),以及T等位基因攜帶者(GT+TT,169.84±55.18μmol/L,P=0.010)。按性別分組發(fā)現(xiàn),男性c.894G＞T多態(tài)與NO濃度相關(guān)(P=0.014),GG純合子NO濃度(138.79±53.536μmol/L)顯著低于GT雜合子(211.01±39.03μmol/L,P=0.004),以及T等位基因攜帶者

12、(GT+TT,199.43±46.99μmol/L,P=0.010):而在女性中未見(jiàn)c.894G＞T多態(tài)性與NO濃度存在關(guān)聯(lián)。此外,臨床樣本中NOS3基因c.894G＞T多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率在EH組和對(duì)照組中的分布無(wú)顯著性差異。
　　 4、病例一對(duì)照人群中,EH組與對(duì)照組的性別和年齡分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。EH組中除SBP、DBP和MAP明顯高于對(duì)照組外,BMI、血清T-chol、TG、LDL-chol、血鈣和血鈉也高于對(duì)照

13、組;而EH組HDL-chol水平則明顯低于對(duì)照組。
　　 5、病例一對(duì)照人群中c.172G＞A多態(tài)性基因型頻率和等位基因頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡。關(guān)聯(lián)分析結(jié)果未見(jiàn)SOD3基因c.172G＞A多態(tài)性基因型和等位基因EH存在關(guān)聯(lián)。方差分析結(jié)果顯示,不同c.172G＞A基因型攜帶者血清HDL-chol水平存在顯著差異(P=0.022),GG純合子HDL-chol水平(1.66±0.53mmol/L)顯著高于GA雜合

14、子(1.57±0.36 mmol/L,P=0.022)。此外,GG純合子血清鐵離子水平(17.70±7.56μmol/L)明顯高于GA雜合子和AA純合子(16.16±7.56μmol/L,P=0.017)。按性別分組后結(jié)果顯示,在男性中c.172G＞A多態(tài)性GG純合子HDL-chol水、F(1.67±0.51mmol/L)明顯高于GA雜合子和AA純合子(1.54±0.42mmol/L,P=0.042):而在女性中,不同c.172G＞A基

15、因型攜帶者血清鐵離子水平差異明顯(P=0.004),GG純合子血清鐵(16.37±6.25 mmol/L)明顯高于GA雜合子(13.95±5.82 mmol/L,P=0.000)。
　　 6、病例.對(duì)照人群中NOS3基因c.894G＞T多態(tài)性基因型和等位基因分布符合Hardy-Weinberg平衡。C.894G＞T多態(tài)性等位基因和基因型在EH組和對(duì)照組間分布無(wú)顯著性差異。對(duì)c.894G＞T多態(tài)性與血壓和相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行分析,結(jié)果未見(jiàn)

16、明顯相關(guān)性。
　　 7、SOD3基因c.172G＞A多態(tài)性和NOS3基因c.894G＞T多態(tài)性不同組合與原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果顯示,在臨床樣本中,同時(shí)攜帶SOD3基因GG基因型與NOS3基因GG基因型的個(gè)體在高血壓中的頻率明顯高于對(duì)照組(P=0.028):而同時(shí)攜帶SOD3基因GA或AA基因型與NOS3基因GG基因型構(gòu)成的個(gè)體在高血壓中的頻率卻顯著性低于對(duì)照組(P=0.025)。在病例-對(duì)照人群中不同基因型組合與高血壓之間未