可注射性葡聚糖-明膠支架與生物因子復(fù)合的研究.pdf

1、第一部分:可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架的實驗研究
　　目的:檢測可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架與傳代分離獲取的滑膜間充質(zhì)干細胞的相容性。
　　方法:消化滑膜組織，傳代分離以獲取滑膜間充質(zhì)干細胞，通過氧化葡聚糖，氨基化明膠，配制不同比例的葡聚糖-明膠復(fù)合支架，并檢測支架的相關(guān)參數(shù):凝膠時間、流變性能、溶脹性能及降解性能;接種滑膜間充質(zhì)干細胞于葡聚糖-明膠復(fù)合支架上，于第3d和7d進行WST-1分析。
　　結(jié)果:傳代

2、分離獲取的滑膜間充質(zhì)干細胞呈梭型;葡聚糖-明膠復(fù)合支架孔壁薄，孔徑范圍為50-200μ m，且相鄰孔隙間貫通率高;當(dāng)葡聚糖與明膠比為5∶5時，水凝膠成膠最快;流變儀檢測在95s時葡聚糖-明膠體系儲能模量和損耗模量相等，體系出現(xiàn)凝膠點，發(fā)生從液態(tài)向固態(tài)的轉(zhuǎn)變，表明可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架可通過注射快速成膠;SMSCs在普通細胞培養(yǎng)組（對照組）、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6和3∶7配比的可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架組均可良好生

3、長，WST-1檢測發(fā)現(xiàn)SMSCs在可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架上隨明膠含量及培養(yǎng)時間的增加增殖更好，差異有顯著性，P＜0.05。
　　結(jié)論:可注射性新型葡聚糖-明膠復(fù)合支架生物相容性良好，是軟骨組織工程中一種良好的材料支架。
　　第二部分:滑膜間充質(zhì)干細胞在五種不同趨化因素作用下遷移的實驗研究
　　目的:觀察血清、TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic對兔滑膜間充質(zhì)干細胞遷移能力的影響。

4、>　　方法:選取含濃度分別是0.1％，0.5％，1.0％，2.0％，5.0％，10.0％，20.0％的血清以及含濃度是50ng/ml的TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic的低糖DMEM作用于兔滑膜間充質(zhì)干細胞，通過Transwell小室檢測其遷移能力。
　　結(jié)果:血清、TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic均可趨化兔滑膜間充質(zhì)干細胞遷移，血清濃度為5.0％時趨化遷移作用較其他濃度組明顯

5、，四種生物因子中PDGF-AB的趨化遷移作用較TGF-β3、BMP-2、FGF-basic明顯。
　　結(jié)論:兔滑膜間充質(zhì)干細胞可在TGF-β3、PDGF-AB、BMP-2、FGF-basic作用下趨化遷移，其中PDGF-AB的趨化作用最明顯，可用于促進滑膜間充質(zhì)干細胞遷移歸巢，進行軟骨原位再生的修復(fù)研究。
　　第三部分葡聚糖-明膠支架復(fù)合生物因子成軟骨的實驗研究
　　目的:研究和比較SMSCs與復(fù)合TGF-β3、PDG

6、F-AB、BMP-2、FGF-basic的葡聚糖-明膠支架在裸鼠體內(nèi)的成軟骨能力。
　　方法:采用3只裸鼠6周齡，每只裸鼠皮下注射分五組:TGF-β3組:TGF-β3復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架;PDGF-AB組:PDGF-AB復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架;BMP-2組:BMP-2復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架;FGF-basic組:FGF-basic復(fù)合SMSCs/葡聚糖-明膠支架;對照組:SMSCs/葡聚糖-明膠支架

7、。術(shù)后8周處死裸鼠，取出皮下支架組織標(biāo)本，分別作HE染色、甲苯胺藍染色，組織學(xué)觀察成軟骨的情況。
　　結(jié)果:新生軟骨大體標(biāo)本呈乳白色類似天然軟骨，無紅色浸潤，質(zhì)地較強有彈性;HE染色和甲苯胺藍染色顯示TGF-β3組、BMP-2組、FGF-basic組細胞分布均勻，大量軟骨樣細胞外基質(zhì)形成，對照組和PDGF-AB組則均呈陰性。
　　結(jié)論:葡聚糖-明膠支架注射入裸鼠體內(nèi)后呈現(xiàn)了良好的生物相容性;生物因子TGF-β3、BMP-2、