版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
人乳頭狀瘤病毒(HPV)是宮頸癌、頭頸部皮膚癌、食道癌等癌癥的致病因素。隨著口服避孕藥的廣泛應(yīng)用以及雌激素替代療法的使用,雌激素是否會(huì)增加雌激素使用者感染HPV的風(fēng)險(xiǎn)目前尚無定論。本實(shí)驗(yàn)研究了雌二醇對(duì)人永生化表皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染人乳頭狀瘤病毒16型E6基因的影響和機(jī)制,探討外源性雌激素的使用是否增加人乳頭狀瘤病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)。
方法:
單層培養(yǎng)的人永生化表皮細(xì)胞系(HaCat)以不同濃度的17-β
2、-雌二醇(E2)及4-羥基三苯氧胺(4-OHT)處理后,以脂質(zhì)體-2000作為載體將含人乳頭狀瘤病毒16型E6基因的質(zhì)粒對(duì)HaCat細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后以熒光相對(duì)定量PCR法測定細(xì)胞中HPV16型E6基因的表達(dá)。在不同的時(shí)間點(diǎn)以細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制HaCat細(xì)胞生長曲線,以MTT法測定HaCat細(xì)胞活性。流式細(xì)胞儀檢測HaCat細(xì)胞凋亡情況與細(xì)胞周期分布。BrdU法測定HaCat細(xì)胞周期的時(shí)相。Western Blot法測定雌激素受體α和β兩
3、種亞型蛋白水平的表達(dá)。
結(jié)果:
1.細(xì)胞計(jì)數(shù)法繪制的生長曲線顯示,濃度為10-5-10-7mol/L的E2促進(jìn)HaCat細(xì)胞生長。濃度為10-8-10-9mol/L的E2對(duì)HaCat細(xì)胞的生長無明顯的促進(jìn)作用。濃度為10-5-10-7mol/L的4-OHT對(duì)HaCat細(xì)胞的生長無明顯的影響。
2.MTT法結(jié)果顯示濃度為10-6-10-8mol/L的E2明顯增強(qiáng)HaCat細(xì)胞活性。而濃度為10-5
4、與10-9mol/L的E2與濃度為10-5-10-7mol/L的4-OHT對(duì)HaCat細(xì)胞的活性無明顯影響。
3.流式細(xì)胞儀的結(jié)果顯示經(jīng)E2處理的HaCat細(xì)胞出現(xiàn)了凋亡比率增加,并具有濃度依賴性。同時(shí)4OHT處理的HaCat細(xì)胞的凋亡率也有輕微增加,但未見明顯的濃度相關(guān)性。這兩種藥物都不影響該細(xì)胞系細(xì)胞周期的各階段的分布。
4.BrdU法結(jié)果顯示,E2使HaCat細(xì)胞的細(xì)胞周期時(shí)相縮短,高濃度4-OHT可將
5、細(xì)胞周期的時(shí)間延長,但其余濃度則對(duì)此并無影響。
5.Western blot結(jié)果顯示E2處理的HaCat細(xì)胞雌激素受體-β的表達(dá)增加,具有濃度依賴趨勢;雌激素受體-α的表達(dá)與E2的濃度無明顯相關(guān)。4-OHT作用后兩種雌激素受體的亞型均沒有檢測到。
6.熒光相對(duì)定量-PCR顯示經(jīng)過E2處理的細(xì)胞轉(zhuǎn)染人乳頭狀瘤病毒16型E6基因后,隨著E2濃度的增加,人乳頭狀瘤病毒16型E6基因的mRNA表達(dá)明顯增加。4-OHT
6、作用后人乳頭狀瘤病毒16型E6基因mRNA表達(dá)減少,但各濃度之間無明顯差異。
結(jié)論:
1.E2增加人乳頭狀瘤病毒16型E6基因轉(zhuǎn)染HaCat細(xì)胞的效率。其機(jī)制可能與E2通過雌激素受體加速宿主細(xì)胞生長及增殖有關(guān);
2.E2增加HaCat細(xì)胞ER-β蛋白水平的表達(dá);ER-β在E2影響人乳頭狀瘤病毒16型E6基因轉(zhuǎn)染的過程中可能存在關(guān)鍵性的作用;
3.雌激素受體拮抗劑可能降低人乳頭狀瘤病
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 人乳頭狀瘤病毒16E7在人喉癌細(xì)胞系中的轉(zhuǎn)染及表達(dá).pdf
- 人乳頭狀瘤病毒16型E5基因的克隆和表達(dá).pdf
- 蘭州地區(qū)人乳頭瘤病毒16型E6、E7基因的克隆及表達(dá).pdf
- 人乳頭瘤病毒11型E6基因的克隆、真核表達(dá)及其功能的初步研究.pdf
- 牛乳頭狀瘤病毒的檢測及其細(xì)胞感染試驗(yàn).pdf
- 導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤與人類乳頭狀瘤病毒關(guān)系的研究.pdf
- 人乳頭狀瘤病毒不同基因型感染與宮頸病變的關(guān)系.pdf
- 人乳頭狀瘤病毒感染與鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤的發(fā)病及惡變關(guān)系的研究.pdf
- 抗人乳頭瘤病毒16型E6基因核酶對(duì)宮頸癌CaSKi細(xì)胞增殖和侵襲力的影響.pdf
- 頭頸部腫瘤人乳頭狀瘤病毒感染及其臨床特征.pdf
- 甲狀腺乳頭狀癌雌激素受體α36(ERα36)的表達(dá)及其臨床意義.pdf
- 發(fā)夾狀核酶阻斷人乳頭狀瘤病毒轉(zhuǎn)化口腔上皮細(xì)胞研究.pdf
- 高危型人乳頭瘤病毒早期蛋白E6和E7調(diào)控細(xì)胞周期的機(jī)制研究.pdf
- 乳腺導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀瘤高危型人乳頭瘤病毒DNA檢測的臨床研究.pdf
- 人毛乳頭細(xì)胞永生化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 人乳頭瘤病毒16型E6蛋白真核表達(dá)及對(duì)巨噬細(xì)胞分泌功能與凋亡的影響.pdf
- 子宮頸人乳頭狀瘤病毒檢測和治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- 人乳頭瘤病毒(HPV)相關(guān)疾病中HPV16 E2、E6、E7基因突變及E6、E7抗原表達(dá)的研究.pdf
- 鼻腔及副鼻竇內(nèi)翻性乳頭狀瘤的臨床病理、免疫表型、人乳頭狀瘤病毒分型與預(yù)后的關(guān)系.pdf
- 人乳頭狀瘤病毒感染狀況與子宮頸病變的關(guān)系.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論