2012-2014年我國(guó)部分地區(qū)豬偽狂犬病的分子流行病學(xué)調(diào)查與分析.pdf

1、偽狂犬?。≒seudorabies，PR）是一種由偽狂犬病毒感染引起的，呈散發(fā)性或地方疫源性流行的急性、接觸性動(dòng)物傳染病。豬作為 PRV的唯一儲(chǔ)藏宿主，仔豬感染后致死率可達(dá)100％，是危害養(yǎng)豬業(yè)的重要疫病之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
　　為了更進(jìn)一步了解PRV在我國(guó)的流行情況，分析PRV的流行趨勢(shì)及變異特點(diǎn)，本研究應(yīng)用PCR的方法對(duì)我國(guó)多個(gè)省市的PRV感染情況進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)PCR陽性的病料樣本，進(jìn)一步用PCR的方法特異性擴(kuò)增

2、病毒的中和抗原編碼基因gB和gC，以及毒力基因gE和TK，得到病毒的基因序列。運(yùn)用生物信息學(xué)分析軟件DNAStar對(duì)gB、gC及gE的同源性進(jìn)行分析，運(yùn)用MEGA5.0軟件的Clustal W算法對(duì)gB、gC、gE及TK蛋白的氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)，構(gòu)建病毒蛋白變異的進(jìn)化樹。
　　本研究中共檢測(cè)了2014年來自全國(guó)流行21個(gè)省市185家豬場(chǎng)的1005份病料及本實(shí)驗(yàn)室保存的2012和2013年的病料。并擴(kuò)增得到了病毒的毒力基因gE和TK

3、，以及中和抗原基因 gB和 gC的核苷酸序列，分析了這些我國(guó)感染毒株之間的同源性、并構(gòu)建了氨基酸序列變異的進(jìn)化樹。研究結(jié)果顯示，檢測(cè)出樣本陽性的豬場(chǎng)為22.2%，樣本的陽性率為12.4%。并獲得了22株P(guān)RV的gB基因，16株P(guān)RV的gC基因，15株P(guān)RV的gE基因以及10株P(guān)RV的TK基因，并分析了這些病毒基因在不同省市的分布情況。序列比對(duì)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，獲得的22個(gè)毒株的gB基因，有20個(gè)編碼915個(gè)氨基酸，這些氨基酸與Bartha株相比

4、，在280-282位和93-95位有氨基酸的插入，在74-78位有3個(gè)氨基酸的缺失，他們與 Bartha株的氨基酸相似性為96.8%-97.0%，核苷酸相似性為97.9%-98.0%，且與Bartha株處于不同的分支中；獲得的16個(gè)PRV gC基因，編碼的488個(gè)氨基酸，這些氨基酸在62-70位氨基酸位點(diǎn)處有7個(gè)氨基酸的插入，與Bartha株的氨基酸序列相似性為93.1%，核苷酸的相似性為95.8%-95.9%，且與Bartha株處于不

5、同的分支中；15株P(guān)RV的gE基因，編碼580個(gè)氨基酸，與Ea株相比在1488-1490位氨基酸處有3個(gè)氨基酸的插入，與 Ea株的氨基酸序列的相似性為99.1%-99.5%，核苷酸序列的相似性為99.6%-99.8%，與Ea株、Fa株、La、Min-A株等流行毒株處于不同的分支中；10個(gè)PRV TK基因，編碼321個(gè)氨基酸，與Bartha株TK基因的氨基酸序列的相似性為99.1%-99.4%，核苷酸序列的相似性為99.6%-99.7%，