甜橙莖陷點型弱毒株基因型的時空分布及其田間防效評估.pdf

1、由柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起的柑橘衰退病是嚴重危害柑橘產(chǎn)業(yè)的主要病害之一，廣泛分布于世界各柑橘產(chǎn)區(qū)。隨著我國柑橘品種結(jié)構(gòu)調(diào)整，加大了柚類和甜橙品種的推廣，CTV莖陷點強株系的為害日趨嚴重。國內(nèi)外研究經(jīng)驗表明，在CTV強毒株和強力傳媒橘蚜區(qū)域，弱毒株交叉保護（Mild Strain Cross Prorection，MSCP）是防治莖陷點型衰退病最有效的方法。由于強弱毒株中基因型的構(gòu)成，與弱毒株

2、的防治效果有關(guān)，因此掌握CTV弱毒株中不同基因型含量的變化規(guī)律將有助于深入研究MSCP防治CTV的機理。
　　本研究基于不同基因型CTV ORF1a的序列差異，設(shè)計了T3基因型的特異性引物T3-4F/R，通過優(yōu)化，建立了T3基因型CTV分離株的實時熒光定量RT-PCR檢測方法，并對該檢測方法的靈敏性、重復(fù)性和可行性進行了評價。同時對CTV弱毒株CT11和CT31在甜橙中各基因型含量的時空變化進行了監(jiān)測，并評價了弱毒株CT11和CT

3、31在田間對衰退病的防治效果。
　　主要研究成果:
　　1.建立的T3基因型CTV實時熒光定量RT-PCR檢測體系具有特異性強，只能特異性檢測含有T3基因型的CTV分離株，所建立的實時熒光定量RT-PCR檢測體系比常規(guī)RT-PCR靈敏100倍，標準曲線循環(huán)閾值與模板濃度呈良好的線性關(guān)系，擴增效率為97.1％，相關(guān)性系數(shù)為0.992，組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于2.94％，該方法擴增效率高、線性范圍廣、重復(fù)性好，適用于對田間樣品的

4、檢測。
　　2.運用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)對弱毒株CT11和CT31中各基因型在甜橙中的時空分布進行了檢測。結(jié)果表明，弱毒株中T30基因型CTV含量最高。CTV不同基因型的含量在植株體內(nèi)存在變化，在夏梢中含量明顯高于春梢和秋梢中含量。
　　3.通過對植株枝條平均節(jié)間長度、植株枝條莖陷點情況、果實大小品質(zhì)分析和T30基因型的含量測定，對田間弱毒交叉保護植株進行防效評估。結(jié)果表明，預(yù)免疫接種弱毒株CT31和CT11均有較好

5、的保護效果，且CT31的保護效果優(yōu)于CT11。平均節(jié)間長度20 mm以上的枝條的植株在CT31、CT11和對照植株中的比例分別是36％、20％、16％;無莖陷點癥狀的植株在接種CT31、CT11和對照植株中的比例分別是92％、64％、46％; CT31、CT11和對照植株中的大果率依次為85.7％、68.7％、32.2％。此外，T30基因型CTV含量與莖陷點癥狀危害程度有一定的關(guān)聯(lián)性，T30基因型CTV含量越高的植株，莖陷點型癥狀越弱，