RAPD及SRAP標記在中國棗屬植物系統(tǒng)分類學中的應用研究.pdf

1、棗屬(Ziziphus Mill．)是鼠李科(Rhamnaceae)中最具經(jīng)濟價值的一個屬。棗屬的近代分類學研究可追溯到18世紀初，但一直以來在棗屬分類問題上比較混亂，曾有40種，60種，100種等多種說法，棗屬屬下分類系統(tǒng)是否自然尚未可知?；诖耍狙芯坎捎肦APD和SRAP技術相結合，對原產(chǎn)我國的棗屬全部14個種和棗的變種進行分析，旨在為棗屬植物的分子系統(tǒng)發(fā)育提供新的證據(jù)，并對棗屬屬下及種下的系統(tǒng)關系進行探討。主要研究結果如下：

2、 1．以棗的成熟鮮葉為試材，分別采用-20℃、-70℃和硅膠脫水干燥3種方法保存樣品，采用簡易CTAB法、高鹽沉淀法與高鹽低pH值法分別對3種方法保存的樣品及對照樣(鮮葉)進行了基因組DNA提取效果的比較分析。結果表明，3種方法均能有效地從棗葉片中獲得質(zhì)量較高的DNA，以高鹽沉淀法所得的DNA純度最高，高鹽低pH值法次之。就DNA的產(chǎn)量而言，高鹽沉淀法的DNA產(chǎn)量相對較低。硅膠干燥法樣品與鮮葉相比，所提DNA的質(zhì)量和產(chǎn)量均無明顯差異

3、，均能滿足PCR擴增要求。硅膠干燥保存法適于野外遠距離采樣。 2．采用正交試驗設計的方法，建立了棗SRAP分析的優(yōu)化反應體系，即20μL反應體系中含有1×buffer，dNTP 200μmol/L、引物各30ng、MgCl<,2> 2.5mmol/L、Taq酶1.0U和模板DNA20ng。適宜的擴增程序為94℃預變性5min；94℃變性1min，33℃復性1min，72℃延伸1min，5個循環(huán)；94℃變性1min，53℃復性1m

4、in，72℃延伸1min，30個循環(huán)；最后72℃延伸5min。本研究建立的棗SRAP體系重復性好，穩(wěn)定性強。 3．在26個供試材料中，31個RAPD引物共擴增出921條帶，多態(tài)性條帶為919條，多態(tài)性比率為99.78％。RAPD聚類結果表明：以0.77的相似系數(shù)為閾值，所有供試材料被分為七類，即第一類包括毛脈棗；第二類包括滇棗、毛果棗、無瓣棗、毛葉棗、褐果棗、皺棗；第三類包括斯氏銅錢樹；第四類包括棗、酸棗及棗的變種；第五類包括大

5、果棗、蜀棗和山棗；第六類包括小果棗；第七類包括球棗。 4．在26個供試材料中，19個SRAP引物組合共擴增出580條帶，多態(tài)性條帶為570條，多態(tài)性比率為98.28％。SRAP聚類分析表明：以0.75的相似系數(shù)為閾值，所有供試材料被分為五類，即第一類包括毛脈棗、滇棗、毛果棗、無瓣棗、毛葉棗、褐果棗、皺棗；第二類包括斯氏銅錢樹；第三類包括棗、酸棗及棗的變種；第四類包括大果棗、蜀棗和山棗；第五類包括小果棗和球棗。 5．通過R