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文檔簡(jiǎn)介
1、腸出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic E.coli,EHEC)是一種腸道致病菌,1983年,Riley在美國(guó)Michigan和Oregon的一起出血性腸炎暴發(fā)中首次分離到,同年由Karmali等人分離得到O157:H7血清型。O157:H7主要通過(guò)食用被污染的食物傳染,它可造成腎功能不全,溶血性尿毒綜合征(HUS)、血栓性血小板減少性紫癜(TTP),個(gè)別患者可因急性和慢性腎功能衰竭而死亡。近年來(lái),由于新發(fā)現(xiàn)的病原微生物和
2、重新抬頭的病原微生物導(dǎo)致的傳染病是衛(wèi)生界關(guān)注的重大問(wèn)題,微生物進(jìn)化是導(dǎo)致新的病原體出現(xiàn)的內(nèi)在因素。在細(xì)菌進(jìn)化過(guò)程中既可以獲得對(duì)抗生素的耐藥性或毒力,也可以缺失一部分基因增強(qiáng)生命力,由弱毒菌變成強(qiáng)毒菌。本研究中針對(duì)細(xì)菌進(jìn)化過(guò)程中的這些特點(diǎn),在齊小保博士基因芯片篩查結(jié)果分析的基礎(chǔ)上,利用Cluster和TreeView軟件,將發(fā)生基因缺失的菌株進(jìn)行分類(lèi),分為A1、A2、B和KM類(lèi),選取人21,65,143,223,248,五株1999年徐州
3、人群爆發(fā)的源于病人的菌株以及A2類(lèi)10株菌作PCR驗(yàn)證,結(jié)果顯示:1.人21,65,143,223,248,cva120,882364,050島z1797,1799,1800基因全部缺失;人21,65,143,223,882364,076島z2970,2971,2972,2973,2974,2976,2977,2978,2979,2980發(fā)生全部缺失,人248,cva120,076島未發(fā)生缺失,但它們stx1發(fā)生了缺失。2.A2類(lèi)菌株中
4、045、050、093、0108的部分基因發(fā)生了普遍缺失,其中與代謝相關(guān)的基因有17個(gè);與基因水平轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因有26個(gè);與結(jié)構(gòu)蛋白相關(guān)的基因有7個(gè);與調(diào)節(jié)相關(guān)的基因有9個(gè);未知功能的基因有12個(gè)。 在基因芯片篩查中以及PCR檢測(cè)中發(fā)現(xiàn),在1999、2000年徐州、安徽、河南、日本的15份病人或動(dòng)物標(biāo)本中050島有Z1797、z1799基因的普遍缺失;而在大腸桿菌O157:H7 EDL933的全序列注釋中,050島z1824與C
5、NF2氨基酸序列有31.29%的同源性;基于以上兩點(diǎn),我們有必要對(duì)出血性大腸桿菌O157:H7的O50島進(jìn)行功能初探,在本研究中,首先從z1824入手,成功構(gòu)建了pET-30a(+)-z1824表達(dá)載體,并通過(guò)克隆子測(cè)序、雙酶切、PCR鑒定以及SDS-PAGE和Western-Blot證實(shí)表達(dá)的蛋白為O50島Z1824,在此基礎(chǔ)上,參考細(xì)胞壞死毒素的致病性,進(jìn)行了Hela細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示:在重組蛋白。Hela細(xì)胞毒性的初步研究中發(fā)
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