穿心蓮內(nèi)酯類化合物的體外UGT代謝的研究.pdf

1、目的:研究穿心蓮中主要成分穿心蓮內(nèi)酯、脫水穿心蓮內(nèi)酯、去氧穿心蓮內(nèi)酯的體外葡萄糖醛酸化代謝，闡明其代謝結(jié)合位點(diǎn)、參與其代謝的主要尿苷二磷酸葡萄糖醛酸化轉(zhuǎn)移酶(UGTs)單酶亞型、不同種屬對穿心蓮內(nèi)酯類化合物的葡萄糖醛酸化代謝的種屬差異、代謝產(chǎn)物的藥理活性以及三種主要成分之間聯(lián)合用藥時可能存在的藥物藥物相互作用(DDI)。
　　方法:(1)體外代謝實(shí)驗(yàn):采用不同種屬混合肝微粒體和12種UGT重組單酶體外孵育的方法，對穿心蓮內(nèi)酯類化合

2、物的葡萄糖醛酸化代謝進(jìn)行研究，包括代謝酶的歸屬、不同種屬對其代謝的種屬差異以及代謝動力學(xué)的研究;(2)利用植物化學(xué)方法和波譜學(xué)方法分離鑒定穿心蓮內(nèi)酯類化合物的葡萄糖醛酸化的代謝產(chǎn)物;(3)通過LPS刺激RAW264.7細(xì)胞后的NO抑制作用，來測定原型和代謝產(chǎn)物的體外抗炎活性。
　　結(jié)果:穿心蓮內(nèi)酯類化合物在人肝微粒體中葡萄糖醛酸化代謝的代謝產(chǎn)物為19位β-D-葡萄糖醛酸化產(chǎn)物;UGTs單酶中UGT2B7、-1A3、-1A4、-2B

3、4參與了它們葡萄糖醛酸化，其中UGT2B7為主要參與單酶亞型;穿心蓮內(nèi)酯和去氧穿心蓮內(nèi)酯在人肝微粒體中表現(xiàn)為雙向代謝動力學(xué)，脫水穿心蓮內(nèi)酯表現(xiàn)為經(jīng)典米氏代謝動力學(xué)，穿心蓮內(nèi)酯類化合物在單酶中均表現(xiàn)為米氏代謝動力學(xué)并得到了其相關(guān)動力學(xué)參數(shù)（Vmax， Km， Ki和CLint）;動物中除了大鼠對穿心蓮內(nèi)酯不發(fā)生葡萄糖醛酸化代謝外，穿心蓮內(nèi)酯類化合物19位葡萄糖醛酸化反應(yīng)在其他種屬中均有發(fā)現(xiàn)，穿心蓮內(nèi)酯類化合物的3位葡萄糖醛酸化反應(yīng)在豬、猴

4、中均有發(fā)生。此外，脫水穿心蓮內(nèi)酯的3位葡萄糖醛酸化反應(yīng)在大鼠和小鼠中也有發(fā)生;活性研究表明:穿心蓮內(nèi)酯類化合物19位葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物仍然具有一定的抗炎活性，但3位葡萄糖醛酸化產(chǎn)物除穿心蓮內(nèi)酯3位葡萄糖醛酸化產(chǎn)物仍具活性外，其余3位葡萄糖醛酸化產(chǎn)物無抗炎活性;此外，去氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對穿心蓮內(nèi)酯的葡萄糖醛酸化代謝表現(xiàn)為競爭性抑制，其Ki分別為2.5μM和12.8μM。
　　結(jié)論:本次研究中我們首次報(bào)道了穿心蓮內(nèi)酯類化

5、合物在人和五種種屬微粒體中的葡萄糖醛酸化代謝，確定了其在不同種屬中的代謝產(chǎn)物的結(jié)構(gòu);UGT2B7是其葡萄糖醛酸化代謝中的主要參與單酶;值得注意的是人體內(nèi)葡萄糖醛酸化代謝產(chǎn)物仍然具有一定的抗炎活性;人和不同種屬對穿心蓮內(nèi)酯類化合物的葡萄糖醛酸化代謝存在較大的種屬差異，人體主要為19位點(diǎn)葡萄糖醛酸化產(chǎn)物，動物種屬中發(fā)現(xiàn)了3位葡萄糖醛酸化產(chǎn)物;穿心蓮內(nèi)酯類化合物在聯(lián)合應(yīng)用時，去氧穿心蓮內(nèi)酯和脫水穿心蓮內(nèi)酯對穿心蓮內(nèi)酯的葡萄糖醛酸化存在一定的抑